Biosseparação cromatográfica do interferão α-2b utilizando sílica funcionalizada com líquidos iónicos

• Autor(a) principal: Sousa, Guilherme Lobo e
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/30598
• topic: Proteínas recombinantes; Interferão alfa-2b; Purificação; Cromatografia; Líquidos iónicos suportados

A utilização de biofármacos tem aumentado ao longo dos anos. Em particular, o interferão alfa-2b apresenta atividades antiviral, antiproliferativa e imunomodeladora, encontrando-se indicado para o tratamento de diversas neoplasias e infeções virais. Não obstante a importância clínica do interferão alfa-2b, o seu custo é ainda relativamente elevado devido essencialmente à falta de estratégias downstream económicas, pelo que se torna necessário o desenvolvimento de processos de fabrico capazes de fornecer biofármacos com alta pureza e atividade biológica que atendam os requisitos das agências reguladoras. Face ao exposto, o principal objetivo deste trabalho consiste na preparação de líquidos iónicos suportados em sílica e posterior aplicação para a extração e purificação seletivas do interferão alfa-2b a partir de extratos recombinantes de E. coli. Desta forma, foram sintetizados líquidos iónicos suportados em partículas de sílica esférica, nomeadamente, [Sil][C3C1Im]Cl, [Sil][N3114]Cl, [Sil][N3116]Cl, [Sil][N3118]Cl, [Sil][N3222]Cl, [Sil][N3444]Cl, [Sil][N3666]Cl e [Sil][N3888]Cl. A caracterização destes materiais demonstrou que os líquidos iónicos se encontravam corretamente imobilizados no suporte, mas com diferentes graus de imobilização. Após produção e recuperação do interferão alfa-2b a partir de corpos de inclusão, foi delineada uma estratégia cromatográfica para a sua purificação através da otimização da composição da fase móvel (força iónica e pH), visando explorar maioritariamente a presença de interações iónicas ou hidrofóbicas entre a proteína alvo e os SILs sintetizados. Após várias otimizações em batch, os resultados mais promissores foram obtidos com o [Sil][C3C1Im]Cl , permitindo a eluição do interferão alfa-2b com uma pureza aceitável com 0,35 M de NaCl (injeção da amostra com Tris 10 mM pH 8, seguido de eluição com 0,35 e 1,5 M de NaCl) e com 1,0 M de sulfato de amónio (injeção da amostra com 1,8 M de sulfato de amónio, seguida de eluição com 1,0 e 0,5 M de sulfato de amónio e Tris 10 mM), em condições que favoreciam principalmente interações iónica e hidrofóbicas, respetivamente. As condições referidas foram aplicadas em coluna, sendo de realçar o resultado promissor na purificação do interferão alvo no SIL já referido, bem como ao nível da reprodutibilidade dos resultados e regeneração do suporte. Além disso, deve ser mencionado, que outros SILs também exibiram um desempenho de purificação melhorado, não se comportando apenas como trocadores de aniões e ligantes hidrofóbicos, mas também exibindo um comportamento multimodal. Em conclusão, este trabalho demonstrou o alto potencial apresentado pelos SILs para serem aplicados como fases estacionárias na cromatografia líquida preparativa de proteínas terapêuticas. Contudo, para fortalecer esta possibilidade, esforços futuros devem incluir a avaliação da citotoxicidade, da estabilidade e atividade proteica, entre outros aspetos.