Interferência com a mitose por siRNAs contidos em nanopartículas

• Autor(a) principal: Silva, Susana Filipa Alves
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/8204
• topic: Biologia molecular; Cancro do pulmão; Ácido ribonucleico; Terapêutica

Devido à sua incidência e agressividade, o cancro do pulmão é considerado a doença oncológica mais mortal e mais frequentemente diagnosticada em todo o mundo. A toxicidade associada aos tratamentos levou a que novas estratégias terapêuticas tenham sido investigadas, entre as quais a terapia molecular alvo-dirigida, cujo alvo terapêutico é o checkpoint mitótico, parte integrante de um mecanismo de sobrevivência celular que assegura a correta segregação dos cromossomas na anafase, prevenindo uma iniciação prematura da segregação dos cromossomas. Dois dos “alvos” terapêuticos deste checkpoint são os genes que codificam para as proteínas Mad2 e BubR1, cuja repressão, pelo uso de técnicas de RNA de interferência, causa instabilidade cromossómica e leva à formação de tetraploidias e aneuploidias celulares. Devido à instabilidade e inespecificidade celular do RNA, que impossibilita a injeção direta dos oligonucleótidos de siRNA por técnicas hidrodinâmicas, o desenvolvimento de vetores para o transporte desses siRNAs é um pré-requisito para a melhoria do sucesso desta terapia. Desta forma, tem sido estudada a ligação dos siRNAs a vetores catiónicos, entre os quais, nanopartículas de quitosano, que proporcionam uma elevada efetividade e especificidade da terapêutica e reduzem os efeitos tóxicos. Face ao exposto, neste trabalho pretendeu-se interferir com a expressão dos genes das proteínas do checkpoint mitótico, Mad2 e BubR1, em linhas tumorais de CPNPC usando sequências de siRNA encapsuladas em nanopartículas de quitosano, de forma a verificar se o silenciamento/ redução da expressão dos genes Mad2 e BubR1 interfere com a sobrevivência e proliferação dessas linhas tumorais. Os resultados obtidos nas linhas de CPNPC mostram-nos que os siRNAs utilizados são eficientes na interferência da expressão dos genes Mad2 e BubR1, tendo-se verificado o silenciamento de ambas as proteínas nas células transfetadas, que exibem um fenótipo típico com placas metafásicas incompletas e cromossomas desalinhados; verificou-se também que o silenciamento de BubR1 não afeta tão severamente a expressão da BubR1, em comparação com o silenciamento de Mad2. Tendo em consideração o papel que ambas as proteínas desempenham no checkpoint mitótico, podemos concluir que as alterações verificadas ao nível da expressão poderão comprometer as suas respetivas funções e, consequentemente levar a uma segregação cromossómica incorreta, comprometendo a viabilidade e a proliferação celular e constituindo, desta forma, uma estratégia terapêutica promissora para o CPNPC.