Sal quaternário de 2-metilbenzotiazole como ligando cromatográfico para a purificação de proteínas

• Autor(a) principal: Alves, Liliana Preciosa Moreira
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/4798
• topic: Cromatografia de Afinidade; Esterificação de Steglich; Purificação de Proteínas; Sal de 2-Metilbenzotiazole; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Engenharia Química

A cromatografia de afinidade é o método de purificação mais seletivo para proteínas e outras biomoléculas. O desenvolvimento de novos suportes cromatográficos tem sido um tema de grande importância e interesse por parte de investigadores de diferentes áreas, no intuito de encontrar um suporte ideal que reúna características tais como custos baixos, eficiência, reutilizabilidade e estabilidade física e química. O sal de 2-metilbenzotiazole utilizado neste trabalho é de síntese fácil, baixo custo e apresenta na sua estrutura um braço espaçador longo e um grupo carboxílico que transformam este ligando sintético potencialmente adequado para a imobilização numa matriz e para posteriores estudos cromatográficos. Foram estudados vários métodos de imobilização do ligando à matriz no sentido de avaliar qual o melhor método para a imobilização deste tipo de ligandos. Dentro destes, a esterificação de Steglich revelou ser o método mais eficaz na imobilização do sal de 2-metilbenzotiazole a uma matriz de Sepharose CL-6B. Foram sintetizados vários suportes com diferentes densidades de ligando. Os suportes assim obtidos foram quantitativa e qualitativamente caracterizados por microscopia eletrónica de varrimento, espetroscopia de raios-X por dispersão em energia e análise elementar. Adicionalmente, foram exploradas as interações de afinidade entre os suportes cromatográficos obtidos e várias proteínas modelo. Os melhores resultados foram obtidos utilizando o suporte com a menor densidade de ligando, ou seja, de 0,18 mmol de sal de 2-metilbenzotiazole/g de suporte cromatográfico, o qual permite separar a ribonuclease, a a-quimotripsina e a albumina de soro bovino a partir de uma mistura artificial de proteínas. A separação das três proteínas foi conseguida através da eluição por passos, com a diminuição gradual da concentração de sulfato de amónio no tampão de eluição. Estes estudos iniciais permitiram demonstrar o potencial da aplicabilidade de ligandos catiónicos, tais como os sais de 2-metilbenzotiazole, para separação e purificação de proteínas por meio de cromatografia de afinidade, revelando um comportamento cromatográfico distinto e com boa reprodutibilidade.