Carbocianinas em cromatografia de afinidade

• Autor(a) principal: Paulo, Ivo Manuel Sobral Cordeiro
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/6103
• topic: Carbocianinas; Cromatografia de Afinidade; Esterificação de Steglish; Purificação de Proteínas; Sais de Amónio Quaternário; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia:: Outras Engenharias e Tecnologias

Diferentes áreas da biologia dependem da cromatografia para obtenção de biomoléculas, sendo a cromatografia de afinidade o método de purificação mais seletivo para proteínas e outras biomoléculas. O desenvolvimento de novos suportes cromatográficos tem sido um tema investigado intensivamente no intuito de se encontrar um bom suporte, que reúna um equilíbrio ideal de características, tais como custos baixos, eficiência, elevada capacidade e estabilidade físico-química. Utilizando a esterificação de Steglich, que em anteriores trabalhos se tinha mostrado eficaz para a imobilização de ligandos a uma matriz de agarose, foram sintetizados vários suportes cromatográficos com dois ligandos e diferentes densidades de ligando. Como ligandos imobilizados foram utilizadas duas carbocianinas simétricas que diferem no número de anéis aromáticos da sua constituição. As carbocianinas simétricas são constituídas por dois anéis heterocíclicos iguais ligados por uma cadeia de três átomos de carbono com ligações duplas conjugadas. Posteriormente, foram estudadas as interações de afinidade entre os suportes cromatográficos obtidos e as várias proteínas modelo, dando preferência às interações iónicas e hidrofóbicas. Dentro de todos os resultados obtidos, o suporte com concentração inicial de 0,078mmol de ligando, apresentou picos mais bem definidos, tanto na separação da mistura proteica como nos testes com as proteínas isoladas, indicando ser o melhor suporte numa separação cromatográfica. Estes estudos permitiram demonstrar o potencial da aplicabilidade de ligandos catiónicos, tais como as carbocianinas, para a separação e purificação de proteínas por cromatografia de afinidade.