Knocking-down LAP1 using the short hairpin RNA strategy

• Autor(a) principal: Costa, Patrícia Monte Lira Rodrigues da
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/11619
• topic: Biomedicina; Biologia molecular; Proteínas; Mitose; Ácido ribonucleico

A proteína 1B associada com a lâmina é uma proteína intrínseca da membrana interna nuclear que está abundantemente expressa nos tecidos neuronais, nomeadamente no estriado, tronco cerebral e cerebelo. A LAP1 está associada com a lâmina nuclear e pensa-se que estabiliza a arquitetura do invólucro nuclear (NE). A função da LAP1B ainda não é compreendida, mas pensa-se que serve de local de ligação entre a lâmina e a membrana interna nuclear. Além disso, a LAP1 pode estar também envolvida na organização dos microtúbulos do fuso mitótico durante a mitose. Uma vez que a função da LAP1 não é conhecida, induziu-se o knockdown em células de neuroblastoma humanas através da estratégia de RNA de interferência pela variante short hairpin, para mimetizar o comportamento da célula na ausência da LAP1. Através de immunoblotting e de microscopia de fluorescência, confirmou-se a diminuição dos níveis da LAP1B, assim como da LAP1C, uma isoforma ainda não sequenciada até ao momento. Novamente, por immunoblotting, os níveis intracelulares da lâminaB1, α-tubulina acetilada e da Polimerase poli ADPRibose (PARP) foram avaliados por uma análise global da integridade celular. Por microscopia confocal, a morfologia dos núcleos celulares e a distribuição da α-tubulina acetilada foram observados para analisar a integridade do invólucro nuclear. Os nossos dados sugerem que a LAP1B parece ser essencial para a distribuição da α-tubulina acetilada e, consequentemente, para a estabilidade dos microtúbulos durante a mitose. Existem evidências que a outra isoforma parece desempenhar um papel mais importante na morfologia e integridade do invólucro nuclear. Ambas as isoformas parecem desempenhar um papel essencial na regulação da mitose. Contudo, são necessários estudos adicionais para confirmar estes resultados e desvendar a função específica das isoformas da LAP1 durante a mitose.