Caracterização do gene gip de Phytophthora cinnamomi Rands associado à doença da Tinta do castanheiro e pesquisa de novos fitofármacos no controlo da doença

• Autor(a) principal: Martins, Maria de Fátima Tomé
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10198/5817
• topic: Castanheiro; Phytophthora cinnamomi Rands; GIP; RT-qPCR; SDS-PAGE; Plasmídios

Uma característica notável da interacção entre plantas e microrganismos patogénios de espécies de Phytophthora é a produção de proteínas inibidoras de glucanases (GIP) relacionadas com a doença da Tinta do castanheiro. Dada a grande importância do castanheiro (Castanea sativa Mill) ao nível da economia e ecologia na região do Nordeste Transmontano, tornou-se necessário melhorar o conhecimento sobre os mecanismos de infecção de Phytophthora cinnamomi Rands, através do estudo da proteína GIP como mecanismo de resposta a proteínas hidrolíticas, endo-β-1,3-glucanases por parte da planta. Este estudo, teve como objectivo clonar o gene gip e avaliar a expressão por gel de SDS-PAGE em diferentes tempos de indução e determinar em qual dos substratos naturais utilizados existe maior expressão por RT-qPCR. Paralelamente foram efectuados biotestes com plantas Castanea sativa Mill e com Phytophthora cinnamomi de modo a estudar a capacidade antimicrobiana de óleos essenciais extraídos de Mentha pulegium L. Os resultados deste estudo revelaram que a clonagem foi bem sucedida após a visualização em gel de agarose 0.8 % (v/v) de uma banda de 5369pb e outra de 940pb corresponde ao vector pET-28a(+) e á ORF do gene gip. A expressão da proteína verificou-se às 8 horas de indução pela presença de uma banda 31kDa observada por gel SDS-PAGE. A análise da expressão por RT-qPCR indicou que a expressão do gene gip é maior quando o patogénio cresce na presença de serrim 0.2 % (p/v) como substrato indutor. Os ensaios com óleos essenciais extraídos de Mentha pulegium L revelaram que a P. cinnamomi é inibida a uma concentração de 80 % (v/v), na qual a planta se mantem viavel e a sua sobrevivencia não é afectada. Desta forma o uso deste produto natural como agente activo é de grande importância, especialmente nas regiões que têm soutos como recursos naturais, de grande valor económico, podendo vir a ser uma alternativa ao controlo de P. cinnamomi.