Análise eletroforética em SDS-PAGE comparativa de tecido cardíaco de camundongos patológicos (ob/ob) e sadios (ob/ob) submetidos ao exercício agudo
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Data de Publicação: | 2009 |
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Resumo: | A resistência a insulina pode estar diretamente associada ao desenvolvimento da diabetes tipo II, obesidade e cardiomiopatias com grande incidência de óbito no Brasil e mundo. Neste sentido, compreende-se que a atividade física pode atuar como um agente não farmacológico, prevenindo ou atenuando destes estados patológicos, de modo que a compreensão molecular da relação entre estas patologias e suas reações frente à atividade física é de extrema importância. O estudo proteômico do tecido cardíaco em resposta a estresses fisiológicos como o exercício físico e a disfunções metabólicas como a hiperglicemi, podem levar a uma melhor compreensão molecular do fenótipo desenvolvido por este órgão. Objetivando averiguar este propósito, o presente estudo foca a avaliação do padrão protéico do tecido cardíaco por análises eletroforéticas de camundongos patológicos (ob/ob) e não patológicos (ob/OB) mediante a uma única sessão de exercício agudo em intensidade moderada e alta. Para isto, foram utilizados 18 camundongos, divididos em 2 grupos de exercício moderado (↑↓) e intenso ( ↑) e um grupo controle (C). Os animais foram submetidos a uma única sessão aguda de exercício aquático em tanque de vidro, com carga moderada (↑↓ = 90% Máxima Fase estável de Lactato (MFEL), n=3 ob/ob e n=3 ob/OB), e com carga intensa (↑= acima da MFEL, n=3 ob/ob e n=3 ob/OB). O grupo controle (C, n=3 ob/ob e n=3 ob/OB) não realizou exercício físico. Ao final da sessão de exercício todos os animais foram sedados com éter e eutanasiados por deslocamento cervical. O tecido cardíaco foi retirado, imediatamente congelado em N2 líquido e armazenado a -80 ºC. As amostras foram homogeneizadas em solução de extração, quantificadas por fluorimetria (Qubit®) e 30 μg de amostra foram analisadas em duplicata por SDS-PAGE 12%. Os géis foram corados com azul de Coomassie. A técnica de SDS-PAGE demonstrou uma diminuição da expressão de proteínas com massas moleculares de 66.2 e 45.0 kDa nos grupos de exercício em relação ao grupo controle. A modificação no padrão protéico do tecido cardíaco mediante a uma única sessão de exercício agudo com diferentes intensidades pode indicar o inicio do processo adaptativo ao exercício em sujeitos saudáveis e patológicos. |
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These diseases associated have a high incidence of death in Brazil and the rest of the world. By this mean, physical activity is a non pharmacological agent recommended for prevention and attenuation of these diseases. Thus the understandings of the molecular mechanisms of these pathologies in response to exercise practice are not all elucidated. The proteomic study of heart tissue in response to exercise stimulus combining with metabolic impairments as hyperglycemia may lead to further molecular comprehension of these two phenotypes developed by heart. This study aims to investigate the heart tissue protein by electrophoretical analysis by using pathological (ob/ob) and non-pathological (ob/OB) mice submitted of single and acute swimming exercise session by moderate and high intensities. Eighteen males mice (n = 9 ob/ob and n = 9 ob/OB) with 10 months old were divided into 2 groups; exercise and a control. Exercise session were performed into a glass tank full by pre warmed water (30 +/-1 oC) by moderate (↑↓= 90% MLSS, n = 3 ob / ob and n = 3 ob/OB) and high intensity (↑ = above the MLSS, n = 3 ob / ob and n = 3 ob/OB). The control group (CG, n = 3 ob/ob and n = 3 ob/OB) were not submitted to exercise. At the end of the exercise session, all animals were sedated with ether and euthanized by cervical dislocation. The heart tissue was removed, immediately frozen in liquid N2 and stored at -80 º C. The samples were homogenized in extraction buffer, quantified by fluorimetry (Qubit ®) and 30 μg of sample were analyzed in a SDS-PAGE 12% with two technical replicates. Gels were stained with Coomassie blue and scanned for software quantification analysis (Bionumerics®). SDSPAGE analysis showed a volume decrease in the expression of proteins with molecular masses of 66.2 and 45.0 kDa in the exercise groups compared to the control group. Moreover, heart tissue protein patterns was modified by a single session of acute exercise with different intensity, indicating the beginning of the physiological adaptation process in healthy and pathological subjects.Submitted by Franciene Aguiar (franciene.aguiar@ucb.br) on 2019-07-05T18:12:37Z No. of bitstreams: 1 MarianaDornellesCherobimTCCGraduacao2009.pdf: 1778940 bytes, checksum: 1b6053368c084f8b4065bb270209e129 (MD5)Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2019-07-08T14:34:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarianaDornellesCherobimTCCGraduacao2009.pdf: 1778940 bytes, checksum: 1b6053368c084f8b4065bb270209e129 (MD5)Made available in DSpace on 2019-07-08T14:34:45Z (GMT). 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A resistência a insulina pode estar diretamente associada ao desenvolvimento da diabetes tipo II, obesidade e cardiomiopatias com grande incidência de óbito no Brasil e mundo. Neste sentido, compreende-se que a atividade física pode atuar como um agente não farmacológico, prevenindo ou atenuando destes estados patológicos, de modo que a compreensão molecular da relação entre estas patologias e suas reações frente à atividade física é de extrema importância. O estudo proteômico do tecido cardíaco em resposta a estresses fisiológicos como o exercício físico e a disfunções metabólicas como a hiperglicemi, podem levar a uma melhor compreensão molecular do fenótipo desenvolvido por este órgão. Objetivando averiguar este propósito, o presente estudo foca a avaliação do padrão protéico do tecido cardíaco por análises eletroforéticas de camundongos patológicos (ob/ob) e não patológicos (ob/OB) mediante a uma única sessão de exercício agudo em intensidade moderada e alta. Para isto, foram utilizados 18 camundongos, divididos em 2 grupos de exercício moderado (↑↓) e intenso ( ↑) e um grupo controle (C). Os animais foram submetidos a uma única sessão aguda de exercício aquático em tanque de vidro, com carga moderada (↑↓ = 90% Máxima Fase estável de Lactato (MFEL), n=3 ob/ob e n=3 ob/OB), e com carga intensa (↑= acima da MFEL, n=3 ob/ob e n=3 ob/OB). O grupo controle (C, n=3 ob/ob e n=3 ob/OB) não realizou exercício físico. Ao final da sessão de exercício todos os animais foram sedados com éter e eutanasiados por deslocamento cervical. O tecido cardíaco foi retirado, imediatamente congelado em N2 líquido e armazenado a -80 ºC. As amostras foram homogeneizadas em solução de extração, quantificadas por fluorimetria (Qubit®) e 30 μg de amostra foram analisadas em duplicata por SDS-PAGE 12%. Os géis foram corados com azul de Coomassie. A técnica de SDS-PAGE demonstrou uma diminuição da expressão de proteínas com massas moleculares de 66.2 e 45.0 kDa nos grupos de exercício em relação ao grupo controle. A modificação no padrão protéico do tecido cardíaco mediante a uma única sessão de exercício agudo com diferentes intensidades pode indicar o inicio do processo adaptativo ao exercício em sujeitos saudáveis e patológicos. Insulin resistance is commonly associated to the development of type II diabetes, obesity and related cardiomyopathies. These diseases associated have a high incidence of death in Brazil and the rest of the world. By this mean, physical activity is a non pharmacological agent recommended for prevention and attenuation of these diseases. Thus the understandings of the molecular mechanisms of these pathologies in response to exercise practice are not all elucidated. The proteomic study of heart tissue in response to exercise stimulus combining with metabolic impairments as hyperglycemia may lead to further molecular comprehension of these two phenotypes developed by heart. This study aims to investigate the heart tissue protein by electrophoretical analysis by using pathological (ob/ob) and non-pathological (ob/OB) mice submitted of single and acute swimming exercise session by moderate and high intensities. Eighteen males mice (n = 9 ob/ob and n = 9 ob/OB) with 10 months old were divided into 2 groups; exercise and a control. Exercise session were performed into a glass tank full by pre warmed water (30 +/-1 oC) by moderate (↑↓= 90% MLSS, n = 3 ob / ob and n = 3 ob/OB) and high intensity (↑ = above the MLSS, n = 3 ob / ob and n = 3 ob/OB). The control group (CG, n = 3 ob/ob and n = 3 ob/OB) were not submitted to exercise. At the end of the exercise session, all animals were sedated with ether and euthanized by cervical dislocation. The heart tissue was removed, immediately frozen in liquid N2 and stored at -80 º C. The samples were homogenized in extraction buffer, quantified by fluorimetry (Qubit ®) and 30 μg of sample were analyzed in a SDS-PAGE 12% with two technical replicates. Gels were stained with Coomassie blue and scanned for software quantification analysis (Bionumerics®). SDSPAGE analysis showed a volume decrease in the expression of proteins with molecular masses of 66.2 and 45.0 kDa in the exercise groups compared to the control group. Moreover, heart tissue protein patterns was modified by a single session of acute exercise with different intensity, indicating the beginning of the physiological adaptation process in healthy and pathological subjects. |
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A resistência a insulina pode estar diretamente associada ao desenvolvimento da diabetes tipo II, obesidade e cardiomiopatias com grande incidência de óbito no Brasil e mundo. Neste sentido, compreende-se que a atividade física pode atuar como um agente não farmacológico, prevenindo ou atenuando destes estados patológicos, de modo que a compreensão molecular da relação entre estas patologias e suas reações frente à atividade física é de extrema importância. O estudo proteômico do tecido cardíaco em resposta a estresses fisiológicos como o exercício físico e a disfunções metabólicas como a hiperglicemi, podem levar a uma melhor compreensão molecular do fenótipo desenvolvido por este órgão. Objetivando averiguar este propósito, o presente estudo foca a avaliação do padrão protéico do tecido cardíaco por análises eletroforéticas de camundongos patológicos (ob/ob) e não patológicos (ob/OB) mediante a uma única sessão de exercício agudo em intensidade moderada e alta. Para isto, foram utilizados 18 camundongos, divididos em 2 grupos de exercício moderado (↑↓) e intenso ( ↑) e um grupo controle (C). Os animais foram submetidos a uma única sessão aguda de exercício aquático em tanque de vidro, com carga moderada (↑↓ = 90% Máxima Fase estável de Lactato (MFEL), n=3 ob/ob e n=3 ob/OB), e com carga intensa (↑= acima da MFEL, n=3 ob/ob e n=3 ob/OB). O grupo controle (C, n=3 ob/ob e n=3 ob/OB) não realizou exercício físico. Ao final da sessão de exercício todos os animais foram sedados com éter e eutanasiados por deslocamento cervical. O tecido cardíaco foi retirado, imediatamente congelado em N2 líquido e armazenado a -80 ºC. As amostras foram homogeneizadas em solução de extração, quantificadas por fluorimetria (Qubit®) e 30 μg de amostra foram analisadas em duplicata por SDS-PAGE 12%. Os géis foram corados com azul de Coomassie. A técnica de SDS-PAGE demonstrou uma diminuição da expressão de proteínas com massas moleculares de 66.2 e 45.0 kDa nos grupos de exercício em relação ao grupo controle. A modificação no padrão protéico do tecido cardíaco mediante a uma única sessão de exercício agudo com diferentes intensidades pode indicar o inicio do processo adaptativo ao exercício em sujeitos saudáveis e patológicos. |
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