Desenvolvimento de estratégias de cultura para isolamento de leptospiras fastidiosas e uso de bioinformática para descoberta de novos alvos vacinais e drogáveis para controle da leptospirose animal

• Autor(a) principal: Chideroli, Roberta Torres
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
• Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/9173
• topic: Leptospirose em animais; Leptospira; Bioinformática; Leptospirosis in animals; Leptospira; Bioinformatics

Resumo: leptospirose, causada por espiroquetas do gênero Leptospira, é uma zoonose globalmente disseminada, negligenciada e emergente O isolamento de leptospiras é o primeiro passo para sua caracterização molecular e genotipagem, no entanto, para os sorovares mais fastidiosos, a cultura e isolamento são controversos e laboriosos Com relação ao controle e tratamento da leptospirose, muitos estudos são realizados, mas ainda não existe uma vacina eficaz contra todas as espécies patogênicas ou variedade de antimicrobianos com atuação sobre o quadro de leptospirúria Assim o presente estudo visou primeiramente desenvolver estratégias de cultura e isolamento para as leptospiras fastidiosas e utilizar métodos rápidos de diagnóstico molecular para caracterização e tipificação dos sorovares Posteriormente, a partir do isolamento de novas estirpes, o sequenciamento genômico foi realizado com a finalidade de obtenção de dados de genômica comparativa com outras estirpes disponíveis no GenBank para uma busca in silico de alvos drogáveis e vacinais No primeiro estudo, três formulações de meios de cultura líquidos básicos foram produzidas para isolar e manter leptospiras Em cada formulação (A, B e C) foram adicionados diferentes suplementos para ajudar no crescimento de leptospiras fastidiosas: piruvato de sódio, enzima superóxido dismutase e soro fetal bovino Durante o período aproximado de 55 dias, adotou-se estratégias de troca entre as três formulações de acordo com a observação em microscopia de campo escuro e ao final desse período houve sucesso no isolamento de três estirpes do sorovar Hardjo (dois genotipos, Hardjobovis e Hardjoprajitno) com adaptação total ao meio de cultura Posteriormente, estas culturas foram avaliadas com uso da microscopia eletrônica e notou-se diferenças na morfologia e viabilidade de acordo com a composição do meio No segundo estudo, os genomas desses dois genotipos foram sequenciados, montados e depositados no GenBank A partir desses dados e também de outros genomas de outras espécies de Leptospira foi possível realizar uma abordagem de com base na vacinologia reversa, genômica comparativa e de docking molecular com o uso de ferramentas de bioinformática Para os alvos vacinais, os resultados com base nas características da probabilidade de adesão, TMHMM e densidade de epítopos, sugerem que cinco alvos são bons candidatos e podem ser testados rapidamente em novas formulações de vacinas e posteriormente testados in vivo Para a etapa de docking molecular, oito proteínas preditas como citoplasmáticas e identificadas como essenciais para a sobrevivência de leptospiras foram consideradas bons alvos para novos medicamentos Destacando a proteína de divisão celular FtsZ, que foi o alvo identificado com as melhores características de ligação e, por meio de uma triagem virtual, o ZINC4259719 foi identificado como a melhor molécula para ligar a essa proteína, a fim de inibir sua função eliminando o patógeno A vacinologia reversa e o docking molecular são poderosas ferramentas de bioinformáticas que possibilitam uma busca rápida e sem procedimentos laboriosos, por alvos proteicos específicos que possam ser candidatos a uma nova vacina ou medicamento no controle da leptospirose