Padronização de modelo animal com custo reduzido para o estudo da necrose isquêmica da cabeça femoral : análise por radiografia digital, tomografia computadorizada, microscopia de luz, imunohistoquímica e estudo da marcha

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Miashiro, Edson Hidenori
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/8418
Resumo: Resumo: Introdução: A necrose isquêmica da cabeça femoral (NICF) afeta adultos, entretanto acomete também crianças, na forma da Doença de Legg-Calvé-Perthes (DLCP) Objetivos: Nosso objetivo é padronizar um modelo experimental de NICF para o estudo da DLCP, com custo reduzido Também, propõe-se introduzir testes de avaliação da marcha, proporcionando uma análise funcional Material e métodos: Onze leitões machos foram submetidos ao procedimento cirúrgico no quadril direito, sendo o esquerdo utilizado como controle Induziu-se a necrose por meio de cerclagem dupla sobre o colo do fêmur direito (COLFD) com fio inabsorvível Seccionou-se o ligamento redondo Os leitões foram divididos em: Grupo A, com oito animais, sacrificando-se dois animais respectivamente na 2ª, 4ª, 6ª e 8ª semanas após a indução da necrose e Grupo B, com dois animais, submetidos a todo procedimento, exceto à cerclagem do COLFD para comprová-la como indutora da necrose (Sham) Realizou-se a observação visual da marcha nos determinados tempos de estudo, utilizando a Classificação de Etterlin et al: , marcha normal;1, marcha irregular; 2, claudicação moderada e 3, claudicação severa ou ausência de deambulação O Grupo B foi sacrificado na 6ª semana Os fêmures foram dissecados e armazenados por congelamento A seguir realizou-se a radiografia digital (RD), tomografia computadorizada (TC) e análise macroscópica Mediu-se a altura da epífise (A) do ápice da superfície articular até o ponto médio da fise metafisária Mediu-se a largura da epífise (D) do ponto máximo medial ao máximo lateral na transição cabeça-fise metafisária Calcularam-se os coeficientes epifisários (COE) por meio da razão entre “A” e “D” Os fêmures foram armazenados e preparados para microscopia de luz e imunohistoquímica utilizando o “Transforming Growth Factor Beta 1” (TGF-ß1) Resultados: No Grupo A foram operados 9 leitões, com 8 evoluindo para NICF direita e 1 óbito por sepse Todos os leitões apresentaram marcha grau 2 As cabeças femorais direitas apresentaram na RD e TC, áreas de esclerose óssea, achatamento, colapso e fragmentação Os valores da “A” e do COE da cabeça femoral direita apresentaram-se menores que os da contralateral e da “D” em 7 animais (87,5%) Nas placas de crescimento das cabeças femorais direitas observaram-se condrócitos agrupados desordenadamente e separados por lacunas vazias No Grupo B, Sham, não ocorreram sinais de NICF nos exames de imagem e histológicos e apresentaram marcha normal O Grupo A, apresentou redução da expressão do TGF-ß1 nas cabeças femorais direitas com 2 e 6 semanas de pós-operatório e esquerdas com oito semanas No Grupo B não houve diferenças de expressão entre os lados Conclusões: O modelo experimental descrito, com estrutura simples demonstrou alterações de isquemia nos exames de imagem, marcha e histo-morfologia O congelamento dos fêmures possibilita a realização da RD e TC nos laboratórios de humanos em data programada e sem o prejuízo do diagnóstico de isquemia por imagem Este recurso permite a conservação da peça anatômica até que seja possível realizar os exames
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2, claudicação moderada e 3, claudicação severa ou ausência de deambulação O Grupo B foi sacrificado na 6ª semana Os fêmures foram dissecados e armazenados por congelamento A seguir realizou-se a radiografia digital (RD), tomografia computadorizada (TC) e análise macroscópica Mediu-se a altura da epífise (A) do ápice da superfície articular até o ponto médio da fise metafisária Mediu-se a largura da epífise (D) do ponto máximo medial ao máximo lateral na transição cabeça-fise metafisária Calcularam-se os coeficientes epifisários (COE) por meio da razão entre “A” e “D” Os fêmures foram armazenados e preparados para microscopia de luz e imunohistoquímica utilizando o “Transforming Growth Factor Beta 1” (TGF-ß1) Resultados: No Grupo A foram operados 9 leitões, com 8 evoluindo para NICF direita e 1 óbito por sepse Todos os leitões apresentaram marcha grau 2 As cabeças femorais direitas apresentaram na RD e TC, áreas de esclerose óssea, achatamento, colapso e fragmentação Os valores da “A” e do COE da cabeça femoral direita apresentaram-se menores que os da contralateral e da “D” em 7 animais (87,5%) Nas placas de crescimento das cabeças femorais direitas observaram-se condrócitos agrupados desordenadamente e separados por lacunas vazias No Grupo B, Sham, não ocorreram sinais de NICF nos exames de imagem e histológicos e apresentaram marcha normal O Grupo A, apresentou redução da expressão do TGF-ß1 nas cabeças femorais direitas com 2 e 6 semanas de pós-operatório e esquerdas com oito semanas No Grupo B não houve diferenças de expressão entre os lados Conclusões: O modelo experimental descrito, com estrutura simples demonstrou alterações de isquemia nos exames de imagem, marcha e histo-morfologia O congelamento dos fêmures possibilita a realização da RD e TC nos laboratórios de humanos em data programada e sem o prejuízo do diagnóstico de isquemia por imagem Este recurso permite a conservação da peça anatômica até que seja possível realizar os examesTese (Doutorado em Ciências da Saúde) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da SaúdeAbstract: Introduction: Avascular necrosis of the femoral head (ANFH) affects adults, however, children are also affected as Legg-Calvé-Perthes Disease (LCPD) Objectives: Our purpose is standardizing an experimental reduced-cost model of ANFH for LCPD study Additionally, the introduction of gait assessment testing is suggested in order to provide a functional analysis Material and methods: Eleven male piglets were submitted to a surgical procedure on the right hip, and the left one was used as control Necrosis was induced by means of double cerclage on the right femoral neck (RFN), with non-absorbable thread The round ligament was sectioned The piglets were split in Group A, consisting of eight animals, of which two were sacrificed in Weeks 2, 4, 6, and 8 each, respectively, after necrosis induction; and Group B, consisting of two animals submitted to all procedure, except RFN cerclage, in order to prove it as necrosis-inducing factor (sham) The gait was visually observed at the established study timepoints, following the Classification of Etterlin et al: : normal gait; 1: irregular gait; 2: moderate claudication; and 3: severe claudication or absence of deambulation Group B was sacrificed in the sixth Week Femurs were dissected and stored under freezing Thereafter, digital radiography (DR), computerized tomography scan (TC), and macroscopic analysis were conducted Epiphysis height (H) was measured from articular surface apex to metaphyseal physis mean point Epiphysis width (W) was measured from the maximum medial point to the maximum lateral point, on metaphyseal head-physis transition Epiphyseal coefficients (EC) were calculated using the ratio between “H” and “W” Femurs were stored and prepared for light microscopy and immunohistochemistry using “Transforming Growth Factor Beta 1” (TGF-ß1) Results: In Group A, nine piglets were operated on, 8 of which progressed to right ANFH, and 1 died from sepsis All piglets experienced gait grade 2 Right femoral heads showed, on DR and CT scan, areas with bone sclerosis, flattening, collapse, and fragmentation Right femoral head “H” and EC values were lower than the contralateral ones, and lower than “W” in 7 animals (875%) In the right femoral heads growth plates, chondrocytes were observed to be disordered and separated by empty gaps In Group B, Sham, there were no signs of ANFH on imaging and histological testing, and gait was normal Group A had reduced TGF-ß1 expression on right femoral heads at 2 and 6 weeks post-surgery, and on the left ones, at eight weeks In Group B there were no differences between sides Conclusions: The experimental model described, with a simple structure, revealed ischemia changes on imaging tests, gait and morpho-histology Femurs freezing enables the conduction of DR and CT scans in human laboratories at a scheduled date, without affecting the ischemia diagnosis through imaging This resource allows to preserve the anatomical piece until the conduction of tests is possibleAlmeida, Sílvio Henrique Maia de [Orientador]Fornazieri, Marco AurélioChikude, TakeshiGrion, Cíntia Magalhães CarvalhoMurachovsky, JoelMiashiro, Edson Hidenori2024-05-01T11:33:32Z2024-05-01T11:33:32Z2020.0004.06.2020info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/8418porDoutoradoCiências da SaúdeCentro de Ciências da SaúdePrograma de Pós-Graduação em Ciências da SaúdeLondrinareponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-07-12T04:20:26Zoai:repositorio.uel.br:123456789/8418Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bibliotecadigital.uel.br/PUBhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/OAI/oai2.phpbcuel@uel.br||opendoar:2024-07-12T04:20:26Repositório Institucional da UEL - Universidade Estadual de Londrina (UEL)false
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