Fator hemolítico em Candida tropicalis
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2024 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UEL |
Texto Completo: | https://repositorio.uel.br/handle/123456789/8578 |
Resumo: | Resumo: Embora o fator hemolítico seja reconhecido como um possível fator que contribui para a patogenicidade de espécies de Candida, a atividade hemolítica de Candida tropicalis e sua expressão ainda permanecem pouco conhecidas Neste estudo foi analisada a secreção do fator hemolítico em 16 isolados de C tropicalis provenientes de diversos sítios de infecção (urina, sangue, mucosa oral, escarro, unha e mucosa vaginal) Todos os 16 isolados de C tropicalis exibiram hemólise-beta (lise completa dos eritrócitos) com um halo externo de hemólise-alfa (lise parcial dos eritrócitos) A atividade do fator hemolítico no sobrenadante de cultivo de C tropicalis também foi analisada Similarmente ao encontrado no ensaio em placa, não houve diferenças significativas (P>,5) na atividade hemolítica entre os isolados testados Ainda, a atividade hemolítica não foi inibida pelo tratamento com o calor (1°C) ou pela adição de pepstatina A Em nível molecular, foi identificado um possível gene que confere um fator hemolítico em C tropicalis (CtHLP) e sua expressão foi avaliada utilizando a técnica de RT-PCR quantitativa (RT-qPCR) Em experimentos preliminares, o emprego de oligonucleotídeos especificamente desenhados para o possível gene CtHLP e para o gene de controle constitutivo CtACT, nos permitiu verificar que possivelmente o fator hemolítico é diferencialmente expresso em função do tempo de incubação A expressão do gene CtHLP foi máxima em 7 h de incubação em meio RPMI, onde tempos posteriores resultaram em queda na expressão Os resultados obtidos ampliam nosso conhecimento das bases moleculares e bioquímicas da atividade hemolítica em C tropicalis |
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Fator hemolítico em Candida tropicalisCandidaTestes microbiológicosHemóliseMicrobiologia molecularMicrobiological assayMolecular microbiologyHemolysisCandidaResumo: Embora o fator hemolítico seja reconhecido como um possível fator que contribui para a patogenicidade de espécies de Candida, a atividade hemolítica de Candida tropicalis e sua expressão ainda permanecem pouco conhecidas Neste estudo foi analisada a secreção do fator hemolítico em 16 isolados de C tropicalis provenientes de diversos sítios de infecção (urina, sangue, mucosa oral, escarro, unha e mucosa vaginal) Todos os 16 isolados de C tropicalis exibiram hemólise-beta (lise completa dos eritrócitos) com um halo externo de hemólise-alfa (lise parcial dos eritrócitos) A atividade do fator hemolítico no sobrenadante de cultivo de C tropicalis também foi analisada Similarmente ao encontrado no ensaio em placa, não houve diferenças significativas (P>,5) na atividade hemolítica entre os isolados testados Ainda, a atividade hemolítica não foi inibida pelo tratamento com o calor (1°C) ou pela adição de pepstatina A Em nível molecular, foi identificado um possível gene que confere um fator hemolítico em C tropicalis (CtHLP) e sua expressão foi avaliada utilizando a técnica de RT-PCR quantitativa (RT-qPCR) Em experimentos preliminares, o emprego de oligonucleotídeos especificamente desenhados para o possível gene CtHLP e para o gene de controle constitutivo CtACT, nos permitiu verificar que possivelmente o fator hemolítico é diferencialmente expresso em função do tempo de incubação A expressão do gene CtHLP foi máxima em 7 h de incubação em meio RPMI, onde tempos posteriores resultaram em queda na expressão Os resultados obtidos ampliam nosso conhecimento das bases moleculares e bioquímicas da atividade hemolítica em C tropicalisDissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em MicrobiologiaAbstract: Although haemolytic factor is known to be putative virulence factor contributing to pathogenicity in Candida species, the haemolytic activity of Candida tropicalis and its expression still poor understood In this study we analyzed the secretion of a haemolytic factor from 16 isolates of C tropicalis isolated from various clinical sites of infection (urine, blood, buccal mucosa, sputum, nail and vaginal mucosa) All 16 C tropicalis isolates exhibited both beta-haemolysis (complete lysis of the erythrocytes) with an outer ring of alpha-haemolysis (partial lysis of the erythrocytes) The activity of a haemolytic factor in the culture supernatant of C tropicalis was also analyzed Similarly to found in plate assays, there were no significant differences (P>5) in the haemolytic activity amongst C tropicalis isolates Furthermore, haemolytic activity was neither inhibited by heat treatment (1°C) nor by the addition of pepstatin A At molecular level, we identify a putative C tropicalis gene that confers a haemolytic factor (CtHLP) and its expression was evaluated using a quantitative RT-qPCR assay In preliminary experiments, the employment of the designed specific primers for a putative CtHLP and an active reference control (CtACT gene) allowed us to verify that the putative haemolytic factor is differently expressed as function of the incubation time The CtHLP was highly expressed up to 7 h incubation in RPMI medium where further incubation resulted in decreased expression The results obtained extend our knowledge about the biochemical and molecular basis of haemolytic activity in C tropicalisFurlaneto, Márcia Cristina [Orientador]Furlaneto-Maia, LucianoSvidzinski, Terezinha Inez EstivaletFavero, Daniel2024-05-01T11:34:51Z2024-05-01T11:34:51Z2008.0018.02.2008info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/8578porMestradoMicrobiologiaCentro de Ciências BiológicasPrograma de Pós-Graduação em MicrobiologiaLondrinareponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-07-12T04:19:40Zoai:repositorio.uel.br:123456789/8578Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bibliotecadigital.uel.br/PUBhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/OAI/oai2.phpbcuel@uel.br||opendoar:2024-07-12T04:19:40Repositório Institucional da UEL - Universidade Estadual de Londrina (UEL)false |
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