Identificação de genes cry e vip do isolado Bacillus thuringiensis BR37 por sequenciamento genômico

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Autor(a) principal: Silva, Kelly Christiane Constanski
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/12665
Resumo: Resumo: Uma alternativa ao uso de inseticidas sinteticos é o uso de produtos biológicos como a bactéria B thuringiensis caracterizada pela produção de proteínas tóxicas a diversas ordens de insetos, as quais são codificadas por genes cry, vip e cyt Este trabalho teve o objetivo de caracterizar molecularmente e sequenciar o isolado BR37, que, em testes anteriores apresentou atividade tóxica frente às espécies da ordem Lepidoptera Amostras de DNA desse isolado foram usadas para reações de amplificação por PCR, visando à identificação dos genes cry1, cry2, cry3, cry4A, cry4B cry1, cry11 e cyt1, utilizando iniciadores específicos Foi possível através dessa técnica identificar a presença dos genes cry1 e cry2 O perfil proteico dos cristais desse isolado foi determinado por SDS-PAGE, onde verificado massas moleculares correspondentes a proteínas de 65e 13 kDa correspondentes as genes cry1 e cry2 respectivamente Em microscopia eletrônica de varredura foi possível verificar cristais esféricos e bipiramidais, os quais podem estar relacionados à toxicidade a insetos da Ordem Lepidoptera e Coleoptera O sequenciamento do DNA genômico foi realizado pela plataforma Ion Torrent, e as sequências obtidas foram analisadas, filtrando as leituras de baixa qualidade, visando a identificação de sequências correspondentes aos genes cry, vip e cyt de referência depositados no banco de dados GeneBank Através do sequenciamento foi possivel obter as subclasses para os genes identificados em PCR: cry1Aa16, cry1Ab15, cry1Ad1, cry1Ca9, cry1Da3, cry1Eb1, cry1Fa1, cry2Aa13 e também um gene ainda não identificado o vip3Ca2 O isolado BR37 apresenta potencial para ser utilizado como fonte de genes cry e vip no desenvolvimento de bioinseticidas e plantas geneticamente modificadas
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spelling Identificação de genes cry e vip do isolado Bacillus thuringiensis BR37 por sequenciamento genômicoInseticidas biológicosBacillus thuringiensisBactériasGenéticaProteínas microbianasBiological insecticidesMicrobial proteinsBacteriaGeneticsResumo: Uma alternativa ao uso de inseticidas sinteticos é o uso de produtos biológicos como a bactéria B thuringiensis caracterizada pela produção de proteínas tóxicas a diversas ordens de insetos, as quais são codificadas por genes cry, vip e cyt Este trabalho teve o objetivo de caracterizar molecularmente e sequenciar o isolado BR37, que, em testes anteriores apresentou atividade tóxica frente às espécies da ordem Lepidoptera Amostras de DNA desse isolado foram usadas para reações de amplificação por PCR, visando à identificação dos genes cry1, cry2, cry3, cry4A, cry4B cry1, cry11 e cyt1, utilizando iniciadores específicos Foi possível através dessa técnica identificar a presença dos genes cry1 e cry2 O perfil proteico dos cristais desse isolado foi determinado por SDS-PAGE, onde verificado massas moleculares correspondentes a proteínas de 65e 13 kDa correspondentes as genes cry1 e cry2 respectivamente Em microscopia eletrônica de varredura foi possível verificar cristais esféricos e bipiramidais, os quais podem estar relacionados à toxicidade a insetos da Ordem Lepidoptera e Coleoptera O sequenciamento do DNA genômico foi realizado pela plataforma Ion Torrent, e as sequências obtidas foram analisadas, filtrando as leituras de baixa qualidade, visando a identificação de sequências correspondentes aos genes cry, vip e cyt de referência depositados no banco de dados GeneBank Através do sequenciamento foi possivel obter as subclasses para os genes identificados em PCR: cry1Aa16, cry1Ab15, cry1Ad1, cry1Ca9, cry1Da3, cry1Eb1, cry1Fa1, cry2Aa13 e também um gene ainda não identificado o vip3Ca2 O isolado BR37 apresenta potencial para ser utilizado como fonte de genes cry e vip no desenvolvimento de bioinseticidas e plantas geneticamente modificadasTese (Doutorado em Agronomia) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em AgronomiaAbstract: As an alternative insecticides of use synthetics and the use of biological products as the bacteria Bacillus thuringiensis characterized by the production of toxic proteins one insects several orders, as what are encoded by genes cry, vip and cyt This study aimed to characterize molecular and sequence the BR37 isolated, which, in previous testes showed toxic front activity at species of lepidoptera order DNA samples that were used isolated by PCR amplification reactions, in order to identify the genes cry1, cry2, cry3, cry4a, cry4b cry1, cry11 and cyt1 using specific primers It was through this technique can identify a presence of cry1 and cry2 The protein profile of this isolated crystals was determined by sds-page, where checked molecular masses corresponding to 65 protein 13 kDa corresponding to genes cry1 and cry2 respectivamente Scanning electron microscopy was possible confirm spherical crystals and bipiramidal, which may be related to the toxicity of one insects order Lepidoptera and Coleoptera The sequencing of genomic dna was carried out by ion torrent platform, and as sequences obtained were analyzed by filtering as low readings quality, aiming to corresponding sequences identify genes aos cry, vip and cit of reference deposited in genbank database Get through do sequencing was possible as genes os subclasses identified for PCR: cry1Aa16, cry1Ab15, cry1Ad1, cry1Ca9, cry1Da3, cry1Eb1, cry1Fa1, cry2Aa13 and also not a gene identified vip3Ca2 The BR37 isolated has potential for use as a source of genes cry and not vipNeves, Pedro Manuel Oliveira Janeiro [Orientador]Vilas-Bôas, Gislayne Fernandes Lemes TrindadeSantoro, Patrícia HelenaAlves, Viviane SandraVentura, Mauricio UrsiPotrich, MichelePassianotto, André Luiz de L.Pasini, AmarildoVilas-Bôas, Gislayne Fernandes Lemes Trindade [Coorientadora]Silva, Kelly Christiane Constanski2024-05-01T14:01:07Z2024-05-01T14:01:07Z2015.0027.03.2015info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/12665porDoutoradoAgronomiaCentro de Ciências AgráriasPrograma de Pós-graduação em AgronomiaLondrinareponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-07-12T04:20:07Zoai:repositorio.uel.br:123456789/12665Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bibliotecadigital.uel.br/PUBhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/OAI/oai2.phpbcuel@uel.br||opendoar:2024-07-12T04:20:07Repositório Institucional da UEL - Universidade Estadual de Londrina (UEL)false
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