Desenvolvimento de método imunológico para detecção de Fusarium verticillioides em ração de aves

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Omori, Aline Myuki
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/10253
Resumo: Resumo: O fungo Fusarium verticillioides é um patógeno primário de milho capaz de produzir diversas micotoxinas causando prejuízos econômicos e problemas à saúde humana e animal Assim, é necessário o desenvolvimento de métodos para detectar esse fungo e fazer o controle de qualidade dos produtos à base de milho Os métodos tradicionais de identificação e detecção geralmente consomem muito tempo e apresentam baixa especificidade e reprodutibilidade A detecção de exoantígeno por meio de métodos imunológicos é uma alternativa rápida e sensível O objetivo deste trabalho, portanto, foi desenvolver um método imunológico para detectar F verticillioides em amostras de ração de aves Inicialmente, anticorpos policlonais IgY contra exoantígeno de F verticillioides 97K foram produzidos em galinhas e caracterizados por ELISA (“Enzyme-linked immunosorbent assay”) e “Western blot” O anticorpo IgY reagiu com o exoantígeno de F verticillioides 97K, porém apresentou reatividade cruzada com exoantígeno de outras espécies fúngicas A análise da reatividade do anticorpo com exoantígeno de diferentes isolados de F verticillioides por “Western Blot” mostrou que duas proteínas, de massas moleculares de 67 kDa e 113 kDa, foram reconhecidas em todos os exoantígenos dos diferentes isolados e portanto, apresentam potencial para serem antígenos espécie-específicos Assim, visando anticorpos mais específicos, anticorpos policlonais de coelho contra a proteína de 67 kDa do exoantígeno de F verticillioides 97K foram produzidos e caracterizados Este anticorpo apresentou menor reatividade cruzada com exoantígeno de outras espécies fúngicas e foi utilizado na detecção de exoantígeno de F verticillioides em amostras de ração por meio de ELISA competitivo indireto com limite de detecção de ,29 µg/mL A concentração de exoantígeno determinada por este método imunoenzimático apresentou forte correlação positiva com a concentração de fumonisina determinada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência na ração com coeficiente de correlação de Pearson de ,76, sugerindo que o ELISA competitivo indireto desenvolvido neste estudo tem potencial para ser utilizado na imunodetecção de F verticillioides em amostras de ração de aves
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Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia ExperimentalAbstract: The fungus Fusarium verticillioides is a primary corn pathogen, it is capable to produce several mycotoxins, causing economic losses and health problems in humans and animals Therefore, the development of methods to detect this fungus and to make the quality control of the products derivative from maize is necessary The traditional methods of identification and detection are usually time consuming and present low specificity and reproducibility The detection of exoantigen by immunological methods is a rapid and sensitive alternative Thus, the objective of this study was to develop an immunological method to detect F verticillioides in poultry feed samples Initially, polyclonal antibodies of laying hens against F verticillioides exoantigen were produced and characterized by ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) and “Western blot” These antibodies reacted with the F verticillioides exoantigen, however showed cross-reactivity with exoantigens from other fungal species The analysis of the reactivity with exoantigen of different F verticillioides isolates by “Western blot” showed that two bands, which present molecular weights of 67 kDa and 113 kDa, were recognized in all different isolates exoantigens and therefore, they present potential to be specie-specifics antigens In order to produce more specific antibodies, polyclonal antibodies of rabbit against the 67 kDa protein of F verticillioides exoantigen were produced and characterized These antibodies presented less cross-reactivity with other fungal species exoantigen and was used for detection of F verticillioides exoantigen in feed samples by indirect competitive ELISA with detection limit of ,29 µg/mL The exoantigen concentration determined by this immunoenzymatic method presented high positive correlation with the fumonisin concentration determined by High Performance Liquid Chromatography in feed with Pearson’s correlation coefficient of ,76, suggesting that indirect competitive ELISA developed in this study has potential to be used in immunodetection of F verticillioides in poultry feed samplesOno, Mário Augusto [Orientador]Watanabe, Maria Angélica EharaVaz Junior, Itabajara da SilvaOmori, Aline Myuki2024-05-01T12:40:50Z2024-05-01T12:40:50Z2013.0008.03.2013info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/10253porMestradoPatologia ExperimentalCentro de Ciências BiológicasPrograma de Pós-Graduação em Patologia ExperimentalLondrinareponame:Repositório Institucional da UELinstname:Universidade Estadual de Londrina (UEL)instacron:UELinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-07-12T04:19:48Zoai:repositorio.uel.br:123456789/10253Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.bibliotecadigital.uel.br/PUBhttp://www.bibliotecadigital.uel.br/OAI/oai2.phpbcuel@uel.br||opendoar:2024-07-12T04:19:48Repositório Institucional da UEL - 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