Caracterização fitoquímica, otimização da extração e quantificação dos princípios ativos do cogumelo Psilocybe cubensis

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Luz, Mateus Araújo da
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPB
Texto Completo: http://tede.bc.uepb.edu.br/jspui/handle/tede/5075
Resumo: Os cogumelos do gênero Psilocybe, cujo nome popular é “cogumelo mágico”, possuem efeitos alucinógenos devido à presença de alcalóides indólicos na sua composição, vêm sendo estudados devido a sua aplicação no tratamento de transtornos mentais como a depressão e ansiedade. Desta forma, este trabalho teve como objetivos realizar o controle de qualidade do cogumelo Psilocybe cubensis e do extrato do mesmo, extrair os alcalóides indólicos com altos rendimentos e obter a psilocina por meio da desfosforilação da psilocibina. O material fúngico seco, foi triturado, peneirado e submetido a extração com etanol. Com o pó do cogumelo foram realizadas medidas do pH em água, que foi de 6,68, da granulometria, sendo um pó semi-fino, possui densidade de 5,5 g/mL, os teores de cadmio e chumbo ambos abaixo de 0,1 μg/g e o teor de cinzas foi 7,4%. Foram realizados testes fitoquímicos com resultado positivo para diversas classes de metabólitos no extrato. Foi desenvolvido e validado um método cromatográfico para a quantificação dos alcalóides seguindo a norma RDC N°166, foi utilizado como fase móvel um gradiente de acetonitrila em água acidificada com ácido fórmico a 0,3%. O limite de detecção foi 1,58 mg/L para a psilocibina e 1,70 mg/L para a psilocina, e o limite de quantificação foi 4,80 mg/L para a psilocibina e 5,17 mg/L para a psilocina. Também foram determinados o efeito matriz e a robustez do método, os quais não foram influentes. Para otimizar a extração da psilocibina foi realizado um planejamento fatorial 23 e posteriormente um planejamento BoxBehnken 24 com variáveis de tempo, pH, quantidade de extrações e volume de solvente extrator, cuja melhor condição para extração ocorre quando o solvente é composto unicamente por etanol com ácido acético a 2% e cinco extrações consecutivas com 4 mL para 100 mg de pó, na qual foram obtidos teores maiores que 3,5% de psilocibina por massa seca de extrato. O extrato foi testado frente as cepas de Staphylococcus aureus ATCC 13656 (Gram positiva), Escherichia coli ATCC 25422 (Gram negativa) e Candida Albicans ATCC 76645 (Fungo), foi utilizado o método de micro diluição em placa de 96 poços varrendo a faixa de 25 – 25000 mg/L, porém se mostraram inativos frente a essas cepas. Por fim, a desfosforilação da psilocibina foi obtida utilizando água acidificada na presença de clorofórmio a uma temperatura de 120°C, foi obtido um rendimento de 16%.
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Com o pó do cogumelo foram realizadas medidas do pH em água, que foi de 6,68, da granulometria, sendo um pó semi-fino, possui densidade de 5,5 g/mL, os teores de cadmio e chumbo ambos abaixo de 0,1 μg/g e o teor de cinzas foi 7,4%. Foram realizados testes fitoquímicos com resultado positivo para diversas classes de metabólitos no extrato. Foi desenvolvido e validado um método cromatográfico para a quantificação dos alcalóides seguindo a norma RDC N°166, foi utilizado como fase móvel um gradiente de acetonitrila em água acidificada com ácido fórmico a 0,3%. O limite de detecção foi 1,58 mg/L para a psilocibina e 1,70 mg/L para a psilocina, e o limite de quantificação foi 4,80 mg/L para a psilocibina e 5,17 mg/L para a psilocina. Também foram determinados o efeito matriz e a robustez do método, os quais não foram influentes. Para otimizar a extração da psilocibina foi realizado um planejamento fatorial 23 e posteriormente um planejamento BoxBehnken 24 com variáveis de tempo, pH, quantidade de extrações e volume de solvente extrator, cuja melhor condição para extração ocorre quando o solvente é composto unicamente por etanol com ácido acético a 2% e cinco extrações consecutivas com 4 mL para 100 mg de pó, na qual foram obtidos teores maiores que 3,5% de psilocibina por massa seca de extrato. O extrato foi testado frente as cepas de Staphylococcus aureus ATCC 13656 (Gram positiva), Escherichia coli ATCC 25422 (Gram negativa) e Candida Albicans ATCC 76645 (Fungo), foi utilizado o método de micro diluição em placa de 96 poços varrendo a faixa de 25 – 25000 mg/L, porém se mostraram inativos frente a essas cepas. Por fim, a desfosforilação da psilocibina foi obtida utilizando água acidificada na presença de clorofórmio a uma temperatura de 120°C, foi obtido um rendimento de 16%.Mushrooms of the genus Psilocybe, whose popular name is “magic mushroom”, have hallucinogenic effects due to the presence of indolic alkaloids in their composition, and have been studied for their application in the treatment of mental disorders such as depression and anxiety. The aims of this study were therefore to carry out quality control of the Psilocybe cubensis mushroom and its extract, extract the indolic alkaloids in high yields and obtain psilocin by dephosphorylating psilocybin. The dried fungal material was crushed, sieved and extracted with ethanol. The mushroom powder was measured for pH in water, which was 6.68, for granulometry, as it is a semi-fine powder with a density of 5.5 g/mL, and for cadmium and lead content, both below 0.1 μg/g, and the ash content was 7.4%. Phytochemical tests were carried out with positive results for various classes of metabolites in the extract. A chromatographic method was developed and validated for the quantification of alkaloids in accordance with RDC standard N°166, using a gradient of acetonitrile:acidified water 5:95 as the mobile phase. The detection limit was 1.58 mg/L for psilocybin and 1.70 mg/L for psilocin, and the quantification limit was 4.80 mg/L for psilocybin and 5.17 mg/L for psilocin. The matrix effect and the robustness of the method were also determined and were not influential. In order to optimize the extraction of psilocybin, a factorial design 23 was carried out and then a BoxBehnken design 24 with the variables of time, pH, quantity of extractions and volume of extracting solvent, the best condition for extraction being when the solvent consisted solely of ethanol with 2% acetic acid, and five consecutive extractions with 4 mL for 100 mg of powder, in which contents greater than 3.5% of psilocybin per dry mass of extract were obtained. The extract was tested against strains of Staphylococcus aureus ATCC 13656 (Gram positive), Escherichia coli ATCC 25422 (Gram negative) and Candida Albicans ATCC 76645 (Fungus), using the micro dilution method in a 96-well plate with a range of 25 - 25000 mg/L, but proved to be inactive against these strains. Finally, the dephosphorylation of psilocybin was achieved using acidified water in the presence of chloroform at a temperature of 120°C, with a yield of 16%.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESUniversidade Estadual da ParaíbaPró-Reitoria de Pós-Graduação e Pesquisa - PRPGPBrasilUEPBPrograma de Pós-Graduação em Química - PPGQTorres, Maria da Conceição MenezesMoura, Ricardo Olímpio dePinto Segundo Neto, José LicarionLuz, Mateus Araújo da2024-09-16T10:52:42Z2999-12-312024-07-31info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfLUZ, Mateus Araújo da. Caracterização fitoquímica, otimização da extração e quantificação dos princípios ativos do cogumelo Psilocybe cubensis. 2024. 123 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Universidade Estadual da Paraíba, Campina Grande, 2024.http://tede.bc.uepb.edu.br/jspui/handle/tede/5075porinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPBinstname:Universidade Estadual da Paraíba (UEPB)instacron:UEPB2024-09-16T10:53:01Zoai:tede.bc.uepb.edu.br:tede/5075Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://tede.bc.uepb.edu.br/jspui/PUBhttp://tede.bc.uepb.edu.br/oai/requestbc@uepb.edu.br||opendoar:2024-09-16T10:53:01Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPB - Universidade Estadual da Paraíba (UEPB)false
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