Atuação de STAT3 diante do perfil de estresse oxidativo em linhagem de mama

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rodrigues, Juliana Alves
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UERJ
Texto Completo: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/16225
Resumo: The STAT3 pathway is constitutively activated in different kinds of tumor, and it is associated with progression and metastasis, due to the function that plays in the proliferation, angiogenesis, migration, invasion, and resistance to apoptosis. Besides the traditional mechanisms of activation of STAT3 pathway as cytokines and growth factors, the oxidative stress in the tumor cells is able to maintain activated. Further the activation by ROS, some research shows a possible regulation by STAT3 from base excision (BER) repair pathway genes, the main responsible for restoring the damage caused by oxidation. Although there is a relation between ROS and STAT3 pathway, but there s no comprehension about the reverse way, how could the STAT3 modulate the oxidative stress. On this, the present work aimed to investigate the relation between the STAT3 pathway and the oxidative stress profile. The assay WST-1 was made to measure the viability after the STAT3 inhibition (Stattic), the BER pathway inhibition (CRT0044786), the doxorubicin treatment and the inhibition of BER pathway in cell line MDA-MB-231. The flow cytometry assay was realized to evaluate the ROS totals levels after inhibition the STAT3 and BER pathways. Then was investigate some reactive species of oxygen, hydroperoxide, NO, and GSH antioxidant, after inhibition of STAT3 pathway. Was performed an assay immunocytochemistry to evaluate a the STAT3 relation with the proteins NRF2, NFκ-B, and 3-NT, responsible for cells detoxification. The assay RT-qPCR was proposed to evaluate the levels of mRNA of APEX1 after inhibition BER pathway. The obtain results show the line cell MDA-MB-231 is dependent on the STAT3 pathway for survival, there was a reduction of 40% on the 10µM concentration in 24 hours of treatment. After inhibition of BER was a reduction of 50 % on the 1 mM of CRT after 6 hours of treatment. The ROS total levels showed a reduction after the STAT3 inhibition, approximately 20 %, 30 % and 90 % on the 5 µM, 10 µM and 20 µM concentration, respectively. The levels of hydroperoxide did not change after inhibition of STAT3, the NO levels rose 25 µM, and the levels of GSH rose 2, approximately. Later the inhibition of STAT3, the NRF2 levels decrease 0,6, the NFκ-B levels reduced 0,6 and the 3-NT levels increased 3, approximately. The mRNA of APEX1 increased 250 times after inhibition of BER pathway. Therefore, the present work indicates that the STAT3 and BER are important for the cell survival, and there is a possible influence of STAT3 for the regulation of ROS levels on the breast cancer cells line.
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Besides the traditional mechanisms of activation of STAT3 pathway as cytokines and growth factors, the oxidative stress in the tumor cells is able to maintain activated. Further the activation by ROS, some research shows a possible regulation by STAT3 from base excision (BER) repair pathway genes, the main responsible for restoring the damage caused by oxidation. Although there is a relation between ROS and STAT3 pathway, but there s no comprehension about the reverse way, how could the STAT3 modulate the oxidative stress. On this, the present work aimed to investigate the relation between the STAT3 pathway and the oxidative stress profile. The assay WST-1 was made to measure the viability after the STAT3 inhibition (Stattic), the BER pathway inhibition (CRT0044786), the doxorubicin treatment and the inhibition of BER pathway in cell line MDA-MB-231. The flow cytometry assay was realized to evaluate the ROS totals levels after inhibition the STAT3 and BER pathways. Then was investigate some reactive species of oxygen, hydroperoxide, NO, and GSH antioxidant, after inhibition of STAT3 pathway. Was performed an assay immunocytochemistry to evaluate a the STAT3 relation with the proteins NRF2, NFκ-B, and 3-NT, responsible for cells detoxification. The assay RT-qPCR was proposed to evaluate the levels of mRNA of APEX1 after inhibition BER pathway. The obtain results show the line cell MDA-MB-231 is dependent on the STAT3 pathway for survival, there was a reduction of 40% on the 10µM concentration in 24 hours of treatment. After inhibition of BER was a reduction of 50 % on the 1 mM of CRT after 6 hours of treatment. The ROS total levels showed a reduction after the STAT3 inhibition, approximately 20 %, 30 % and 90 % on the 5 µM, 10 µM and 20 µM concentration, respectively. The levels of hydroperoxide did not change after inhibition of STAT3, the NO levels rose 25 µM, and the levels of GSH rose 2, approximately. Later the inhibition of STAT3, the NRF2 levels decrease 0,6, the NFκ-B levels reduced 0,6 and the 3-NT levels increased 3, approximately. The mRNA of APEX1 increased 250 times after inhibition of BER pathway. Therefore, the present work indicates that the STAT3 and BER are important for the cell survival, and there is a possible influence of STAT3 for the regulation of ROS levels on the breast cancer cells line.A via de STAT3 encontra-se ativada de forma constitutiva em diferentes tipos de tumor, e é associada a progressão e metástase tumoral, devido ao papel que desempenha na proliferação, promoção de angiogênese, migração, invasão e resistência a apoptose. Salvo os mecanismos tradicionais de ativação da via de STAT3, como citocinas e fatores de crescimento, o estresse oxidativo presente na célula tumoral também é capaz de manter a via ativada. Além da ativação por ROS, estudos mostram ainda, uma possível regulação por STAT3 dos genes da via de reparo por excisão de base, principal responsável por reparar danos causados por oxidação. Apesar de existir uma relação entre o ROS e a via de STAT3, ainda não se compreende como a via de sinalização pode influenciar na modulação do estresse oxidativo. Diante disso, este trabalho objetivou investigar a relação entre a via de sinalização de STAT3 e o perfil de estresse oxidativo. O ensaio de WST-1 foi realizado para avaliar a viabilidade após a inibição da via de STAT3 (inibidor Stattic), da via de BER (CRT0044786) e do tratamento com doxorrubicina e inibição da via de BER na linhagem MDA-MB-231. O ensaio de citometria de fluxo foi realizado para avaliar os níveis de ROS totais após inibição da via de STAT3 e BER. Em seguida foi investigado algumas espécies reativas de oxigênio, hidroperóxidos, NO e o antioxidante GSH após inibição de STAT3. Realizou-se, ainda, um ensaio imunocitoquímico para avaliar a relação de STAT3 com as proteínas NRF2, NFκ-B e 3-NT, responsáveis pela detoxificação celular. O ensaio de RT-qPCR teve o objetivo de avaliar os níveis de mRNA de APEX1 após inibição da via de BER. Os resultados obtidos mostraram que a linhagem MDA-MB-231 é dependente da via de STAT3 para sobrevivência, houve uma redução de aproximadamente 40% na concentração 10 µM em 24 horas de tratamento. Após inibição de BER, houve uma redução de aproximadamente 50% na concentração 1 mM de CRT após 6 horas de tratamento. Os níveis de ROS total mostraram uma redução após inibição de STAT3, de aproximadamente 20%, 30 % e 90% nas concentrações 5 µM, 10 µM e 20 µM, respectivamente. Os níveis de hidroperóxidos não sofreram alteração após inibição de STAT3, os níveis de NO aumentaram 25 µM, aproximadamente, e os níveis de GSH aumentaram 2 vezes, aproximadamente. Após inibição de STAT3, os níveis de NRF2 reduziram 4 vezes, de 0,8 para 0,2, os níveis de NFκ-B reduziram aproximadamente 2 vezes e os níveis de 3-NT tiveram aumento de 3 vezes, aproximadamente. Os níveis de mRNA de APEX1 aumentaram 250 vezes após inibição da via de BER. Portanto, esse trabalho indica que as vias de STAT3 e BER são importantes para sobrevivência celular, e há uma possível influência de STAT3 na regulação dos níveis de ROS presentes na célula da linhagem de mama.Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:14:55Z No. of bitstreams: 1 Juliana Alves Rodrigues Dissertacao completa.pdf: 1927754 bytes, checksum: ecae5703821fa9678d1b27d50d83e8c6 (MD5)Made available in DSpace on 2021-04-26T01:14:55Z (GMT). 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