Apoptose em macrófagos induzida por nanocápsulas com núcleo lipídico (LNC) carregadas com diclofenaco

• Autor(a) principal: Barbosa, Aguyda Rayany Cavalcante
• Data de Publicação: 2016
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/9050517985594977
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM
• Texto Completo: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7510
• topic: Macrófagos; Agentes antiinflamatórios; Artrite reumatóide; Apoptose; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: IMUNOLOGIA; Diclofenaco; Nanocápsula; Macrófago; Inflamação

O Diclofenaco é uma droga anti-inflamatória não esteroide (AINE), utilizada no tratamento de afecções inflamatórias musculoesqueléticas, incluindo as doenças autoimunes como a Artrite Reumatoide (AR). Na sinovite crônica da AR os macrófagos exercem papel central na inflamação e a indução de apoptose destas células pode vir a representar um papel central no tratamento. Neste trabalho, utilizou-se de uma formulação de diclofenaco carregada em nanocápsulas de núcleo lipídico (LNC-DIC), avaliando-se o papel desta formulação na indução de apoptose em macrófagos. A LNC foi formada a partir de um núcleo organogel, revestido com uma parede polimérica poly(e- caprolactona) e estabilizada com polyssorbato 80, obtendo diâmetro D[4,3] de 243nm para DIC e 319nm para LNC-DIC. Dessa forma foram utilizadas as formulações Diclofenaco (DIC), LNC-DIC e apenas LNC em macrófagos humanos (THP-1) e Murinos (J774). A IC50% para toxicidade em macrófagos para as formulações foi 646μM para DIC e 144,5μM para LNC-DIC em THP-1 e 251,7μM para DIC e 24,35μM para LNC-DIC em J774. A formulação LNC-DIC reduziu acentuadamente o potencial de membrana mitocondrial em relação a DIC (-44,65±3,36 e 21,79±2,19, p<0,0001, respectivamente) em THP-1, além de J774 (-5,65±0,88 e -26,59±7,21, p<0,0001). Também houve maior produção de ROS intracelular para LNC-DIC em relação a DIC na linhagem THP-1 (27,24±0,90 e 36,88±2,49, p=0,0002). A formulação LNC-DIC aumentou o percentual de células com caspase-3 ativa comparada à DIC (53,08±6,23 e 81,70±9,09, p=0,0007) e a atividade de caspase-3 nas concentrações estudadas. Além disso, LNC-DIC induziu maior percentual de células Anexina V+ comparada a DIC (6,26±0,34 e 12,68±0,22, p=0,0001). Quando avaliado o índice de dano ao DNA pelo ensaio cometa, não houve diferença entre as formulações testadas DIC e LNC-DIC (44,24±2,65 e 53,33±4,16, p=0,586). Tomados em conjunto, esses resultados demonstram que a formulação nanoencapsulada LNC-DIC tem ação indutora de apoptose, de forma independente do dano ao DNA, possivelmente relacionada a produção de ROS intracelular e/ou estresse do retículo endoplasmático, abrindo assim a possibilidade de um tratamento eficaz e barato para a AR, através do uso de Nanocápsulas de Núcleo Lipídico carregado com Diclofenaco.