Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFBA |
Texto Completo: | http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/29709 |
Resumo: | Diversos estudos utilizando helmintos e suas moléculas têm se baseado na imunomodulação gerada por esses parasitos, na busca de potenciais terapêuticos contra doenças alérgicas, inflamatórias e autoimunes. Nesse contexto, através da tecnologia do DNA recombinante é possível produzir proteínas desses organismos para a elucidação e caracterização dessas moléculas frente a doenças. Objetivo: Identificar a proteína c4299 de Trichuris trichiura (Trichuris_c4299) no extrato proteico de vermes adultos desse helminto e expressar de forma recombinante a proteína Trichuris_c4299 para caracterização imunogênica. Metodologia: Para identificação de Trichuris_c4299 no extrato do verme adulto Trichuris trichiura foi realizado a análise do proteoma por meio de espectrometria de massa acoplado à cromatografia liquida (LC/MS/MS) utilizando o Q-ExactiveTM mass spectrometer. A caracterização da proteína foi realizada primeiramente in silico através de análises de bioinformática e, para isso, foram feitas predições das característica físico-químicas utilizando diferentes ferramentas. O gene codificante de Trichuris_c4299 foi sintetizado por empresa especializada e clonado no vetor pET28a(+) de expressão. A proteína recombinante foi expressa em sistema procarioto e purificada através de cromatografia de afinidade acoplada a uma coluna de níquel HisTrap FF. A imunoreatividade de Trichuris_c4299 recombinante foi analisada por meio de ensaios imunológicos como ELISA e Dot Blot utilizando soro de pacientes infectados com Trichuris trichiura. Resultados: A partir da análise do proteoma foi possível a identificação de Trichuris_c4299 no extrato proteico de machos e fêmeas adultos de Trichuris trichiura. A análise de bioinformática possibilitou a predição de diversas características úteis de Trichuris_c4299 para a sua produção recombinante em Escherichia coli. Além disso, foi padronizado a expressão e purificação da proteína recombinante, e observou-se que a mesma apresentou reatividade no teste de ELISA e de Dot Blot, mostrando assim potencial imunogênico. Conclusão: Nesse trabalho foi possível determinar a presença de Trichuris_c4299 no proteoma dos vermes adultos de Trichuris trichiura e efetuar a padronização da expressão e purificação dessa proteína. Adicionalmente, observou-se que Trichuris_c4299 apresenta imunoreatividade em soro de pacientes infectados. Sendo assim, essa molécula se mostra um novo alvo para futuras investigações acerca de imunomodulação, seja para doenças alérgicas ou para outras doenças inflamatórias e autoimunes. |
id |
UFBA-2_35e12b6beb4dfdcd4f47fde4344a7be9 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.ufba.br:ri/29709 |
network_acronym_str |
UFBA-2 |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFBA |
repository_id_str |
1932 |
spelling |
Santos, Priscila Souza dosSantos, Priscila Souza dosPinheiro, Carina da SilvaPinheiro, Carina da SilvaCosta, Ryan dos SantosFigueiredo, Barbara de Castro Pimentel2019-05-29T14:06:30Z2019-05-292018-08-27http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/29709Diversos estudos utilizando helmintos e suas moléculas têm se baseado na imunomodulação gerada por esses parasitos, na busca de potenciais terapêuticos contra doenças alérgicas, inflamatórias e autoimunes. Nesse contexto, através da tecnologia do DNA recombinante é possível produzir proteínas desses organismos para a elucidação e caracterização dessas moléculas frente a doenças. Objetivo: Identificar a proteína c4299 de Trichuris trichiura (Trichuris_c4299) no extrato proteico de vermes adultos desse helminto e expressar de forma recombinante a proteína Trichuris_c4299 para caracterização imunogênica. Metodologia: Para identificação de Trichuris_c4299 no extrato do verme adulto Trichuris trichiura foi realizado a análise do proteoma por meio de espectrometria de massa acoplado à cromatografia liquida (LC/MS/MS) utilizando o Q-ExactiveTM mass spectrometer. A caracterização da proteína foi realizada primeiramente in silico através de análises de bioinformática e, para isso, foram feitas predições das característica físico-químicas utilizando diferentes ferramentas. O gene codificante de Trichuris_c4299 foi sintetizado por empresa especializada e clonado no vetor pET28a(+) de expressão. A proteína recombinante foi expressa em sistema procarioto e purificada através de cromatografia de afinidade acoplada a uma coluna de níquel HisTrap FF. A imunoreatividade de Trichuris_c4299 recombinante foi analisada por meio de ensaios imunológicos como ELISA e Dot Blot utilizando soro de pacientes infectados com Trichuris trichiura. Resultados: A partir da análise do proteoma foi possível a identificação de Trichuris_c4299 no extrato proteico de machos e fêmeas adultos de Trichuris trichiura. A análise de bioinformática possibilitou a predição de diversas características úteis de Trichuris_c4299 para a sua produção recombinante em Escherichia coli. Além disso, foi padronizado a expressão e purificação da proteína recombinante, e observou-se que a mesma apresentou reatividade no teste de ELISA e de Dot Blot, mostrando assim potencial imunogênico. Conclusão: Nesse trabalho foi possível determinar a presença de Trichuris_c4299 no proteoma dos vermes adultos de Trichuris trichiura e efetuar a padronização da expressão e purificação dessa proteína. Adicionalmente, observou-se que Trichuris_c4299 apresenta imunoreatividade em soro de pacientes infectados. Sendo assim, essa molécula se mostra um novo alvo para futuras investigações acerca de imunomodulação, seja para doenças alérgicas ou para outras doenças inflamatórias e autoimunes.Several studies using helminths and their molecules have been based on the immunomodulation generated by these parasites in the search for therapeutic potentials against allergic, inflammatory and autoimmune diseases. In this context, through recombinant DNA technology it is possible to produce proteins from these organisms for the elucidation and characterization of these molecules against diseases. Objective: To identify the c4299 protein of Trichuris trichiura (Trichuris_c4299) in the protein extract of adult worms of this helminth and to recombinantly express the Trichuris_c4299 protein for immunogenic characterization. Method: For the identification of Trichuris_c4299 in the extract of the adult Trichuris trichiura worm, proteomic analysis was performed by mass spectrometry coupled to liquid chromatography (LC / MS / MS) using the Q-ExactiveTM mass spectrometer. The characterization of the protein was first performed in silico through bioinformatics analyzes and, for this, predictions were made of the physical-chemical characteristics using different tools. The gene encoding Trichuris_c4299 was synthesized by a specialized company and cloned into expression vector pET28a(+).The recombinant protein was expressed in prokaryotic system and purified by affinity chromatography coupled to a HisTrap FF nickel column. Recombinant Trichuris_c4299 immunoreactivity was analyzed by immunological assays such as ELISA and Dot Blot using serum from patients infected with Trichuris trichiura. Results: From the proteomic analysis it was possible to identify Trichuris_c4299 in the protein extract of adult males and females of Trichuris trichiura. Bioinformatics analysis enabled the prediction of several useful features of Trichuris_c4299 for its recombinant production in Escherichia coli. In addition, expression and purification of the recombinant protein were standardized, and it was observed that it showed reactivity in the ELISA and Dot Blot test, thus showing immunogenic potential. Conclusion: In this work it was possible to determine the presence of Trichuris_c4299 in the proteome of the adult worms of Trichuris trichiura and to carry out the standardization of expression and purification of this protein. In addition, Trichuris_c4299 has been shown to exhibit immunoreactivity in serum of infected patients. Therefore, this molecule is a new target for future research on immunomodulation, whether for allergic diseases or for other inflammatory and autoimmune diseasesSubmitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2019-05-27T19:30:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final de Mestrado - Priscila Souza dos Santos.pdf: 1938010 bytes, checksum: 661c42fcfea95e2a5f9f003c4bb077fb (MD5)Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2019-05-29T14:06:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Final de Mestrado - Priscila Souza dos Santos.pdf: 1938010 bytes, checksum: 661c42fcfea95e2a5f9f003c4bb077fb (MD5)Made available in DSpace on 2019-05-29T14:06:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final de Mestrado - Priscila Souza dos Santos.pdf: 1938010 bytes, checksum: 661c42fcfea95e2a5f9f003c4bb077fb (MD5)FAPESBHelmintosimunomodulaçãoTrichuris trichiuraTrichuris_c4299proteína recombinanteProdução e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomoduladorinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis10000-01-01Instituto de Ciências e SaúdePrograma de Pos Graduação em BiotecnologiaICSBrasilinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFBAinstname:Universidade Federal da Bahia (UFBA)instacron:UFBAORIGINALDissertação Final de Mestrado - Priscila Souza dos Santos.pdfDissertação Final de Mestrado - Priscila Souza dos Santos.pdfapplication/pdf1938010https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/29709/1/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20%20Final%20de%20Mestrado%20-%20Priscila%20Souza%20dos%20Santos.pdf661c42fcfea95e2a5f9f003c4bb077fbMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain1383https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/29709/2/license.txt690bb9e0ab0d79c4ae420a800ae539f0MD52TEXTDissertação Final de Mestrado - Priscila Souza dos Santos.pdf.txtDissertação Final de Mestrado - Priscila Souza dos Santos.pdf.txtExtracted texttext/plain107147https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/29709/3/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20%20Final%20de%20Mestrado%20-%20Priscila%20Souza%20dos%20Santos.pdf.txtfffab02db537b57f684317a3455f4068MD53ri/297092022-07-05 14:04:06.271oai:repositorio.ufba.br:ri/29709VGVybW8gZGUgTGljZW4/P2EsIG4/P28gZXhjbHVzaXZvLCBwYXJhIG8gZGVwPz9zaXRvIG5vIFJlcG9zaXQ/P3JpbyBJbnN0aXR1Y2lvbmFsIGRhIFVGQkEuCgogUGVsbyBwcm9jZXNzbyBkZSBzdWJtaXNzPz9vIGRlIGRvY3VtZW50b3MsIG8gYXV0b3Igb3Ugc2V1IHJlcHJlc2VudGFudGUgbGVnYWwsIGFvIGFjZWl0YXIgCmVzc2UgdGVybW8gZGUgbGljZW4/P2EsIGNvbmNlZGUgYW8gUmVwb3NpdD8/cmlvIEluc3RpdHVjaW9uYWwgZGEgVW5pdmVyc2lkYWRlIEZlZGVyYWwgZGEgQmFoaWEgCm8gZGlyZWl0byBkZSBtYW50ZXIgdW1hIGM/P3BpYSBlbSBzZXUgcmVwb3NpdD8/cmlvIGNvbSBhIGZpbmFsaWRhZGUsIHByaW1laXJhLCBkZSBwcmVzZXJ2YT8/Pz9vLiAKRXNzZXMgdGVybW9zLCBuPz9vIGV4Y2x1c2l2b3MsIG1hbnQ/P20gb3MgZGlyZWl0b3MgZGUgYXV0b3IvY29weXJpZ2h0LCBtYXMgZW50ZW5kZSBvIGRvY3VtZW50byAKY29tbyBwYXJ0ZSBkbyBhY2Vydm8gaW50ZWxlY3R1YWwgZGVzc2EgVW5pdmVyc2lkYWRlLgoKIFBhcmEgb3MgZG9jdW1lbnRvcyBwdWJsaWNhZG9zIGNvbSByZXBhc3NlIGRlIGRpcmVpdG9zIGRlIGRpc3RyaWJ1aT8/Pz9vLCBlc3NlIHRlcm1vIGRlIGxpY2VuPz9hIAplbnRlbmRlIHF1ZToKCiBNYW50ZW5kbyBvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcywgcmVwYXNzYWRvcyBhIHRlcmNlaXJvcywgZW0gY2FzbyBkZSBwdWJsaWNhPz8/P2VzLCBvIHJlcG9zaXQ/P3Jpbwpwb2RlIHJlc3RyaW5naXIgbyBhY2Vzc28gYW8gdGV4dG8gaW50ZWdyYWwsIG1hcyBsaWJlcmEgYXMgaW5mb3JtYT8/Pz9lcyBzb2JyZSBvIGRvY3VtZW50bwooTWV0YWRhZG9zIGVzY3JpdGl2b3MpLgoKIERlc3RhIGZvcm1hLCBhdGVuZGVuZG8gYW9zIGFuc2Vpb3MgZGVzc2EgdW5pdmVyc2lkYWRlIGVtIG1hbnRlciBzdWEgcHJvZHU/Pz8/byBjaWVudD8/ZmljYSBjb20gCmFzIHJlc3RyaT8/Pz9lcyBpbXBvc3RhcyBwZWxvcyBlZGl0b3JlcyBkZSBwZXJpPz9kaWNvcy4KCiBQYXJhIGFzIHB1YmxpY2E/Pz8/ZXMgc2VtIGluaWNpYXRpdmFzIHF1ZSBzZWd1ZW0gYSBwb2w/P3RpY2EgZGUgQWNlc3NvIEFiZXJ0bywgb3MgZGVwPz9zaXRvcyAKY29tcHVscz8/cmlvcyBuZXNzZSByZXBvc2l0Pz9yaW8gbWFudD8/bSBvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcywgbWFzIG1hbnQ/P20gYWNlc3NvIGlycmVzdHJpdG8gCmFvIG1ldGFkYWRvcyBlIHRleHRvIGNvbXBsZXRvLiBBc3NpbSwgYSBhY2VpdGE/Pz8/byBkZXNzZSB0ZXJtbyBuPz9vIG5lY2Vzc2l0YSBkZSBjb25zZW50aW1lbnRvCiBwb3IgcGFydGUgZGUgYXV0b3Jlcy9kZXRlbnRvcmVzIGRvcyBkaXJlaXRvcywgcG9yIGVzdGFyZW0gZW0gaW5pY2lhdGl2YXMgZGUgYWNlc3NvIGFiZXJ0by4KRepositório InstitucionalPUBhttp://192.188.11.11:8080/oai/requestopendoar:19322022-07-05T17:04:06Repositório Institucional da UFBA - Universidade Federal da Bahia (UFBA)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador |
title |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador |
spellingShingle |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador Santos, Priscila Souza dos Helmintos imunomodulação Trichuris trichiura Trichuris_c4299 proteína recombinante |
title_short |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador |
title_full |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador |
title_fullStr |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador |
title_full_unstemmed |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador |
title_sort |
Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador |
author |
Santos, Priscila Souza dos |
author_facet |
Santos, Priscila Souza dos |
author_role |
author |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Santos, Priscila Souza dos Santos, Priscila Souza dos |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Pinheiro, Carina da Silva |
dc.contributor.referee1.fl_str_mv |
Pinheiro, Carina da Silva Costa, Ryan dos Santos Figueiredo, Barbara de Castro Pimentel |
contributor_str_mv |
Pinheiro, Carina da Silva Pinheiro, Carina da Silva Costa, Ryan dos Santos Figueiredo, Barbara de Castro Pimentel |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Helmintos imunomodulação Trichuris trichiura Trichuris_c4299 proteína recombinante |
topic |
Helmintos imunomodulação Trichuris trichiura Trichuris_c4299 proteína recombinante |
description |
Diversos estudos utilizando helmintos e suas moléculas têm se baseado na imunomodulação gerada por esses parasitos, na busca de potenciais terapêuticos contra doenças alérgicas, inflamatórias e autoimunes. Nesse contexto, através da tecnologia do DNA recombinante é possível produzir proteínas desses organismos para a elucidação e caracterização dessas moléculas frente a doenças. Objetivo: Identificar a proteína c4299 de Trichuris trichiura (Trichuris_c4299) no extrato proteico de vermes adultos desse helminto e expressar de forma recombinante a proteína Trichuris_c4299 para caracterização imunogênica. Metodologia: Para identificação de Trichuris_c4299 no extrato do verme adulto Trichuris trichiura foi realizado a análise do proteoma por meio de espectrometria de massa acoplado à cromatografia liquida (LC/MS/MS) utilizando o Q-ExactiveTM mass spectrometer. A caracterização da proteína foi realizada primeiramente in silico através de análises de bioinformática e, para isso, foram feitas predições das característica físico-químicas utilizando diferentes ferramentas. O gene codificante de Trichuris_c4299 foi sintetizado por empresa especializada e clonado no vetor pET28a(+) de expressão. A proteína recombinante foi expressa em sistema procarioto e purificada através de cromatografia de afinidade acoplada a uma coluna de níquel HisTrap FF. A imunoreatividade de Trichuris_c4299 recombinante foi analisada por meio de ensaios imunológicos como ELISA e Dot Blot utilizando soro de pacientes infectados com Trichuris trichiura. Resultados: A partir da análise do proteoma foi possível a identificação de Trichuris_c4299 no extrato proteico de machos e fêmeas adultos de Trichuris trichiura. A análise de bioinformática possibilitou a predição de diversas características úteis de Trichuris_c4299 para a sua produção recombinante em Escherichia coli. Além disso, foi padronizado a expressão e purificação da proteína recombinante, e observou-se que a mesma apresentou reatividade no teste de ELISA e de Dot Blot, mostrando assim potencial imunogênico. Conclusão: Nesse trabalho foi possível determinar a presença de Trichuris_c4299 no proteoma dos vermes adultos de Trichuris trichiura e efetuar a padronização da expressão e purificação dessa proteína. Adicionalmente, observou-se que Trichuris_c4299 apresenta imunoreatividade em soro de pacientes infectados. Sendo assim, essa molécula se mostra um novo alvo para futuras investigações acerca de imunomodulação, seja para doenças alérgicas ou para outras doenças inflamatórias e autoimunes. |
publishDate |
2018 |
dc.date.submitted.none.fl_str_mv |
2018-08-27 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2019-05-29T14:06:30Z |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2019-05-29 |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/29709 |
url |
http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/29709 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Instituto de Ciências e Saúde |
dc.publisher.program.fl_str_mv |
Programa de Pos Graduação em Biotecnologia |
dc.publisher.initials.fl_str_mv |
ICS |
dc.publisher.country.fl_str_mv |
Brasil |
publisher.none.fl_str_mv |
Instituto de Ciências e Saúde |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UFBA instname:Universidade Federal da Bahia (UFBA) instacron:UFBA |
instname_str |
Universidade Federal da Bahia (UFBA) |
instacron_str |
UFBA |
institution |
UFBA |
reponame_str |
Repositório Institucional da UFBA |
collection |
Repositório Institucional da UFBA |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/29709/1/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20%20Final%20de%20Mestrado%20-%20Priscila%20Souza%20dos%20Santos.pdf https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/29709/2/license.txt https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/29709/3/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20%20Final%20de%20Mestrado%20-%20Priscila%20Souza%20dos%20Santos.pdf.txt |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
661c42fcfea95e2a5f9f003c4bb077fb 690bb9e0ab0d79c4ae420a800ae539f0 fffab02db537b57f684317a3455f4068 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UFBA - Universidade Federal da Bahia (UFBA) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1808459592522268672 |