Resposta embrionária a meios de cultivo baseados nos fluidos do oviduto e útero de bovinos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Érika Cristina dos
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFABC
Texto Completo: http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=120838
Resumo: Orientadora: Profa. Dra. Marcella Pecora Milazzotto
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spelling Resposta embrionária a meios de cultivo baseados nos fluidos do oviduto e útero de bovinosBOVINOSEMBRIÕES BOVINOSMETABOLISMOBOVINEEMBRYOSMETABOLISMPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOTECNOCIÊNCIA - UFABCOrientadora: Profa. Dra. Marcella Pecora MilazzottoCoorientadora: Profa. Dra. Bianca GasparriniTese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2019.A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos busca mimetizar as condições do trato reprodutivo feminino para obtenção do maior número de embriões e aumento da produtividade animal. Apesar disso, o sistema e meios de cultivo ainda estão aquém dos desejáveis, com a geração de embriões de menor qualidade e baixas taxas de produção embrionária e prenhez quando comparados aos produzidos in vivo. Considerando que grande parte dos meios de cultivo foram desenvolvidos para outras espécies, existe a necessidade da otimização destes adequando-os a PIVE bovina, bem como a compreensão da resposta dos embriões aos meios, buscando assim condições cada vez mais próximas da fisiológica. Assim, o objetivo deste estudo foi a criação e o desenvolvimento de meios de cultivo embrionário sequenciais - denominados Embryonic Culture Supplementation (ECS) - baseados na composição química dos fluidos do oviduto (FO) e útero (FU) bovinos em relação aos substratos energéticos e de aminoácidos. Além disso, neste estudo foi verificada a resposta metabólica dos embriões cultivados neste sistema com aqueles cultivados em meio convencional livre de soro, mediante análise de 3 grupos experimentais: 1) Grupo controle - embriões cultivados em Synthetic oviduct fluid (SOFaa) convencional; 2) ECS 100 - embriões cultivados em meios sequenciais baseados na composição química dos FO e FU bovinos em relação a substratos energéticos e aminoácidos; 3) ECS 50 - embriões cultivados em meios sequenciais baseados na metade da concentração química de substratos energéticos e aminoácidos dos FO e FU bovinos. Para tal, embriões foram produzidos in vitro por protocolos convencionais para as seguintes avaliações em morulas (D4) e blastocistos (D7): produção embrionária, viabilidade celular nas morulas, quantificação do número de células totais, Massa Celular Interna (MCI), Trofoectoderma (TE) e quantificação de transcritos relacionados a qualidade embrionária nos blastocistos, atividade mitocondrial (AM), produção de espécies reativas de Oxigênio (EROs), NADH, FAD+, relação redox, produção de ATP, e análise do perfil de consumo/produção de glicose e piruvato nos meios de cultivo. A produção de embriões foi influenciada positivamente pela redução da quantidade de substratos energéticos e aminoácidos (ECS 50) em relação à conversão de blastocistos e taxa de eclosão (D10). Morulas e blastocistos do ECS 100 apresentaram menor viabilidade e maior atividade metabólica comparado ao embriões do grupo ECS 50. Em conclusão, os embriões do ECS 50 e ECS 100 apresentam diferentes perfis metabólicos e transcricionais quando comparados aos embriões produzidos em meio de cultivo convencional. Além disso, foi demonstrado pela primeira vez que o meio ECS não só é capaz de apoiar o desenvolvimento embrionário de blastocisto, mas a redução na concentração de substratos energéticos e aminoácidos (ECS 50) parece ser benéfica para o desenvolvimento embrionário, sendo uma alternativa para a produção de blastocistos de alta qualidade.The in vitro production of bovine embryos (IVP) seeks to mimic the conditions of the female reproductive tract to obtain the largest number of embryos possible and increase animal productivity. Nonetheless, both the system and culture media are still performing less than desirable by generating lower quality embryos and consequently lower production rates and pregnancies compared to the embryos produced in vivo. Considering that most of the existing culture media were developed for other species, there is a need for optimization by adapting them to bovine IVP, as well as to improve the understanding of embryonic response to the media, seeking conditions more similar to physiological. Thus, the aim of this study is the creation and development of sequential embryonic culture media - namely Embryonic Culture Supplementation (ECS) - based on the chemical composition of the bovine oviduct (FO) and uterus (FU) fluids, specifically regarding the amount of energy substrates and of amino acids. In addition, this study aims to compare the metabolic response of embryos cultured in this new system with those grown in conventional serum-free medium by analyzing three experimental groups: 1) Control group - embryos cultured in conventional Synthetic oviduct fluid (SOFaa); 2) ECS 100 - embryos cultured in sequential media based on the chemical composition (energy substrates and amino acids) of bovine FO and FU; 3) ECS 50 - embryos cultured in sequential media using half the chemical concentration of energy substrates and amino acids of bovine FO and FU. To this end, embryos were produced in vitro by conventional protocols and evaluated in morula (D4) and blastocysts (D7) for the following: embryonic production rates, cell viability in morulae, quantification of total cell number, Inner Cell Mass (ICM), Trofoectoderma (TE), quantification of transcripts related to embryonic quality in blastocysts, mitochondrial activity (MA), production of reactive oxygen species (ROS), NADH, FAD +, redox ratio, ATP production, glucose and pyruvate consumption in the culture media. Embryo production was positively influenced by the reduction in the amount of energy substrates and amino acids (ECS 50) in relation to blastocyst conversion and hatching rate (D10). ECS 100 morulae and blastocysts had lower viability and higher metabolic activity compared to embryos from the ECS 50 group. In conclusion, ECS 50 and ECS 100 embryos have different metabolic and transcriptional profiles when compared to embryos produced in conventional culture medium. In addition, it has been demonstrated for the first time that the ECS medium is not only capable of supporting embryonic blastocyst development, but a reduction in the concentration of energy substrates and amino acids (ECS 50) appears to be beneficial for embryonic development and is an alternative for the production of high quality blastocysts.Milazzotto, Marcella PecoraGasparrini, BiancaSudano, Mateus JoseVecchio, DomenicoAssumpção, Mayra Elena Ortiz D'AvilaSantos, Érika Cristina dos2019info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf100 f. : il.http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=120838http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=120838&midiaext=78042http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=120838&midiaext=78041Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.br/php/capa.php?obra=120838porreponame:Repositório Institucional da UFABCinstname:Universidade Federal do ABC (UFABC)instacron:UFABCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2022-03-25T16:32:48Zoai:BDTD:120838Repositório InstitucionalPUBhttp://www.biblioteca.ufabc.edu.br/oai/oai.phpopendoar:2022-03-25T16:32:48Repositório Institucional da UFABC - Universidade Federal do ABC (UFABC)false
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