Identificação in silico de genes efetores citosólicos a partir do secretoma de Phytophthora parasítica dos citros.

• Autor(a) principal: SOUSA, Ana Paula Moisés de.
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFCG
• Texto Completo: http://dspace.sti.ufcg.edu.br:8080/jspui/handle/riufcg/10762
• topic: Proteínas secretadas; Banco de dados CitEST; Gomose; Glicoproteínas; Secreted proteins; CitEST database; Gummosis; Glycoproteins; Ciências Biológicas

Durante interações planta–patógeno, patógenos secretam proteínas efetoras para o apoplasto e citoplasma vegetal, as quais modulam as respostas de doença ou de resistência das plantas. Devido à importância de Phytophthora parasitica como agente causal da doença gomose dos citros, o objetivo deste trabalho foi identificar genes efetores citosólicos a partir do secretoma de Phytophthora parasitica dos citros, por meio de ferramentas computacionais e ensaios biológicos. Usando o Programa Netglycate, um total de 117 genes de P. parasitica foram identificados no CitEST/PP, que possivelmente codificam glicoproteínas secretadas, com homologia a proteínas de Phytophthora spp. Dentre estes, seis genes foram selecionados como candidatos para estudos futuros de expressão gênica e por isso primers específicos para amplificação por PCR quantitativo em tempo real foram desenhados e sintetizados. Os primers foram validados pela amplificação de DNA total de P. parasitica por PCR, tendo gerado amplicons de tamanhos esperados. Visando os estudos de expressão gênica, fases do desenvolvimento assexual in vitro do patógeno foram obtidas em grande quantidade e a condição de cultivo adequada variou para cada fase. A produção abundante de hifas e clamidósporos foi obtida em meio líquido cenoura-ágar sob luz constante a 25 °C, por 12 e 45 dias, respectivamente. Esporângios de P. parasitica in vitro foram produzidos 5 dias após imersão de discos de micélio em água destilada estéril. Para a ativação da patogenicidade e estudos de interação citros-Phytophthora, P. parasitica foi recuperado de folhas de laranjeiras com sucesso. O RNA total de micélio foi isolado por um método de fenol modificado, por trizol e pelo Kit RNeasy (Qiagen). Os efetores do tipo glicoproteínas identificados são fortes candidatos para estudos de expressão gênica e para o entendimento e controle da gomose em citros.