IdentificaÃÃo e caracterizaÃÃo do potencial probiÃtico de bactÃrias isoladas do leite e queijo caprino

• Autor(a) principal: LouricÃlia Rodrigues De Abreu
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=16206
• topic: ProbiÃticos; VirulÃncia; Genes; ExpressÃo in vitro; Probiotics; virulence; genes; In vitro expression; MICROBIOLOGIA

A busca por novas bactÃrias com propriedades funcionais tem sido foco de intensa pesquisa nas Ãltimas dÃcadas. Diversas espÃcies do gÃnero Lactobacillus jà sÃo conhecidas como probiÃticas e sÃo adicionadas em alimentos. Para uma cultura bactÃriana ser selecionada como probiÃtica à preciso apresentar determinadas caracterÃsticas, como a capacidade de sobreviver Ãs condiÃÃes gastrointestinais e ser livre de patogenicidade. O objetivo desse estudo foi isolar, selecionar e identificar cepas de lactobacilos a partir de leite e queijo de cabra, e avaliar seu potencial probiÃtico e sua inocuidade atravÃs da identificaÃÃo de genes relacionados Ãs caracterÃsticas benÃficas e de riscos para o consumo humano, verificando sua expressÃo in vitro. Foram identificados vinte e trÃs cepas diferentes de Lactobacillus plantarum e adicionadas ao estudo outras quatro cepas de L. plantarum e trÃs Lactobacillus mucosae previamente isoladas. As vinte e nove cepas foram avaliadas quanto à presenÃa de genes relacionados a propriedades probiÃticas como o gene bsh, codificante para a enzima hidrolase de sais biliares, msa, relacionado à capacidade de adesÃo ao epitÃlio intestinal induzido por manose e outros trÃs genes, map, mub e ef-tu associados Ãs propriedades de adesÃo ao muco. Os genes bsh e msa tiveram sua expressÃo avaliada in vitro, por meio de testes bioquÃmicos de desconjugaÃÃo de sais biliares e agregaÃÃo de leveduras, respectivamente. Os resultados mostraram que 80% das cepas testadas foram capazes de sobreviver em presenÃa dos sais biliares e 76% foram capazes de desconjugar pelo menos um dos quatro sais testados. Quanto à capacidade de adesÃo, quatro cepas apresentaram resultado positivo, sendo para trÃs delas confirmada interaÃÃo via manose. Ainda com relaÃÃo Ãs propriedades de adesÃo, apenas duas cepas apresentaram um alto valor de hidrofobicidade da superfÃcie celular, propriedade que tem sido associada indiretamente a essa capacidade, e 90% das cepas estudadas mostraram um perfil genÃtico favorÃvel à ligaÃÃo à mucosa intestinal, apresentando trÃs dos quatro genes de adesÃo avaliados. A inocuidade desses microrganismos tambÃm foi avaliada quanto à presenÃa e expressÃo de doze genes relacionados a fatores de virulÃncia, incluindo a resistÃncia a antimicrobianos e produÃÃo de aminas biogÃnicas. A expressÃo de genes associados à produÃÃo de gelatinase (gelE), e das aminas tirosina (tdc) e histamina (hdc1 e hdc2), bem como à resistÃncia à vancomicina (vanA e vanB) foi investigada por meio de testes bioquÃmicos. Apesar de algumas cepas amplificarem o gene gelE, este nÃo apresentou expressÃo in vitro. Foi constatada in vitro resistÃncia à vancomicina, muito comum entre lactobacilos, sendo observado tambÃm em cepas que nÃo amplificaram os genes vanA e vanB. Com relaÃÃo à produÃÃo de aminas biogÃnicas, apenas o gene tdc para tirosina foi detectado nas cepas, sendo um dos genes com maior frequÃncia de amplificaÃÃo entre as cepas. No entanto, apenas uma cepa que apresentou o gene teve sua expressÃo confirmada no teste in vitro utilizando meio de descarboxilaÃÃo, enquanto que algumas cepas que nÃo amplificaram o gene obtiveram resultado positivo in vitro. Quatorze isolados nÃo amplificaram genes relacionados à virulÃncia. Destas, apenas a cepa Lactobacillus plantarum Q24 nÃo apresentou expressÃo in vitro relacionada a fator de virulÃncia, alÃm de amplificar trÃs dos genes relacionados à adesÃo ao muco, e de ter sobrevivido e desconjugado dois dos sais biliares avaliados, mostrando ser a mais promissora para se prosseguir com os estudos de investigaÃÃo do potencial probiÃtico.