Histoplasma capsulatum var. capsulatum: Taxa de conversÃo in vitro, detecÃÃo do gene ryp1 e estudo da diversidade genÃtica de cepas brasileiras

• Autor(a) principal: Joyce Fonteles Ribeiro
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=9721
• topic: ConversÃo in vitro; in vitro conversion; Histoplasma capsulatum; molecular epidemiology; CIENCIAS DA SAUDE

A histoplasmose, causada pelo fungo dimÃrfico Histoplasma capsulatum, à a mais prevalente das micoses sistÃmicas nas AmÃricas, sendo frequentemente observada em pacientes com AIDS. Desde o inÃcio da epidemia de HIV, na dÃcada de 80, existe um aumento significativo no nÃmero de casos de histoplasmose no Estado do CearÃ, Nordeste do Brasil. A escassez de dados epidemiolÃgicos dos genÃtipos que circulam na regiÃo Nordeste ressalta a importÃncia de estudos mais detalhados sobre a epidemiologia molecular de H. capsulatum nessa regiÃo. Diferentes tÃcnicas moleculares tÃm sido utilizadas para melhor caracterizar o padrÃo genÃtico de cepas de H. capsulatum circulantes no mundo. Vale ressaltar que, grande parte dos estudos de H. capsulatum à realizada na sua fase leveduriforme, quando expressa as suas caracterÃsticas parasitÃrias. Assim, o uso de tÃcnicas laboratoriais para a conversÃo in vitro para a fase leveduriforme e sua manutenÃÃo à extremamente importante. Diante do exposto, o presente estudo objetivou averiguar a taxa de conversÃo in vitro dos isolados de H. capsulatum em seis meios de cultura diferentes, bem como detectar, atravÃs da tÃcnica de PCR, a presenÃa do gene ryp1, um importante regulador transcricional da conversÃo da fase filamentosa para leveduriforme. AlÃm disso, visou conhecer o perfil molecular de cepas de H. capsulatum, de origem humana e veterinÃria, oriundas do Estado do Cearà e da regiÃo Sudeste do Brasil, atravÃs da tÃcnica de RAPD-PCR e avaliar a diversidade genÃtica da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 desses isolados comparados com isolados de outros paÃses, atravÃs do sequenciamento do DNA ribossÃmico nuclear. No estudo de conversÃo in vitro, todos os meios testados foram capazes de possibilitar a conversÃo de fases, contudo, o meio Ãgar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro mostrou a maior capacidade de conversÃo em relaÃÃo aos outros meios testados. O gene ryp1 foi detectado em 18 cepas de H. capsulatum (de origem humana e animal) e em trÃs espÃcimes clÃnicos positivos para H. capsulatum (sangue total) testados, nÃo sendo detectado, contudo, em isolados de Candida albicans, Paracoccidioides brasiliensis, Sporothrix schenckii e Coccidioides posadasii. A anÃlise da variabilidade genÃtica dos isolados de H. capsulatum, pela tÃcnica de RAPD-PCR, permitiu a detecÃÃo de dois clusters que circulam no Estado do CearÃ. O cluster 1 incluiu cepas das regiÃes Sudeste e Nordeste do Brasil, sendo observado dentro desse cluster a separaÃÃo dos isolados em trÃs subgrupos distintos (subgrupos 1a,1b e 1c). O cluster 2, por sua vez, incluiu somente cepas da regiÃo Nordeste do Brasil. NÃo foram observadas diferenÃas nas caracterÃsticas clÃnicas e epidemiolÃgicas dos indivÃduos cujas cepas pertenciam aos diferentes agrupamentos, obtidos pela tÃcnica de RAPD-PCR. O sequenciamento da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 possibilitou a detecÃÃo de dois clados principais. O clado 1 foi constituÃdo da maioria das cepas analisadas, inclusive as cepas da regiÃo Nordeste e incluiu isolados de localizaÃÃes geogrÃficas distintas. O clado 2, por sua vez, foi constituÃdo exclusivamente de isolados oriundos do Estado do Rio de Janeiro. Portanto, pode-se concluir que o Ãgar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro apresentou maior capacidade de conversÃo das cepas de H. capsulatum em relaÃÃo aos outros meios testados, podendo ser considerado o meio de escolha para conversÃo de cepas de H. capsulatum. Ademais, o gene ryp1 pode ser utilizado para identificar isolados de H. capsulatum, bem como, detectar a presenÃa do fungo em amostras clÃnicas, podendo ser utilizado para diagnÃstico de histoplasmose. Por fim, os isolados de H. capsulatum oriundos do Estado do Cearà podem ser agrupados em dois clusters principais, detectados atravÃs da tÃcnica de RAPD-PCR. AlÃm disso, a anÃlise filogenÃtica da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 revelou que as cepas da regiÃo Nordeste apresentaram diferenÃas genÃticas quando comparadas com as cepas de outras regiÃes brasileiras, ficando agrupadas em um cluster diferente das mesmas.