Análise da resistência a Macrophomina phaseolina e mutação em DNA de acessos de meloeiro tratados com raios gama Co60

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Sousa, Willianny Karem de
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Digital da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (RDU)
Texto Completo: http://lattes.cnpq.br/2079609001869001
http://lattes.cnpq.br/2226963304595552
https://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/11368
Resumo: Este estudo teve como objetivo obter linhas mutantes de meloeiro visando avaliar caraterísticas de resistência ao fungo Macrophomina phaseolina e identificar o potencial do tratamento com raios gama em causar alterações genéticas e fenotípicas nos acessos de melão da coleção de germoplasma da UFERSA. Para isso, sementes M0 de dois acessos de melão MR1 e C14 foram irradiadas com cinco diferentes doses (0, 100, 200, 300 e 400 Gy) de radiação gama contendo quatro repetições. Cada repetição tinha 25 sementes. O experimento foi dividido em quatro etapas. Na primeira etapa as sementes irradiadas M1 foram semeadas em substrato e areia, na proporção 1:1 e, mensuradas variáveis como potencial de germinação, taxa de geminação e índice de germinação. Na segunda etapa foi realizado o transplante das plantas germinadas para baldes de oito litros contendo substrato e areia, sendo quatro repetições com 15 plantas, cada. Foram avaliadas as variáveis associadas à floração, lâmina foliar e fruto. Foi utilizado o software de análises de imagens IMAGE J para a obtenção dos dados de folha e fruto e, a partir de mudanças morfológicas foram gerados dois dendrograma pelo método WARD. A partir dos frutos gerados por autofecundação, foram obtidas sementes da geração M2. A terceira e quarta etapa do experimento avaliou a resistência da geração M2 a M. phaseolina a partir da inoculação pelo palito de dente infestado com o fungo e, a análise que avalia a possível ocorrência de mutação a nível molecular a partir do uso de marcadores ISSR. A irradiação gama influenciou o potencial de germinação. A dose 100 Gy (87 %) foi superior ao controle (78,5%), em contrapartida as doses testadas não geraram efeitos na taxa de germinação, índice de germinação, o que evidencia a baixa sensibilidade dos acessos para as doses testadas. O comportamento diferencial de MR1 e C14 mostrou que o acesso MR1 é mais sensível pelo comportamento germinativo próprio do acesso com médias inferiores para todas as variáveis e na interação obteve os valores mais baixos de potencial de germinação (48%) na dose 400 Gy em relação ao controle (60%). As doses de raios gama influenciaram mudanças na floração dos acessos. A produção de flores femininas sofreu uma redução média de 39,35%, as flores masculinas tiveram um incremento com maior quantidade (39,25) na dose 300 Gy em relação ao controle (19,25). O mesmo comportamento foi observado na quantidade de flores bissexuais (0,25), anômalas (4,38), com até 4 pétalas (1,13) e anteras (3,25) com valores superiores para a dosagem de 300 Gy, e para número de flores com mais de 5 pétalas (0,50), que foi obtida pela dosagem 200 Gy. Os efeitos dos raios gama na frutificação foram evidentes na dose 400 Gy onde ser obteve menor quantidade de frutos (10,37). As doses 200 e 300 Gy (26,29 - 29,18) obtiveram uma produção semelhante, enquanto a maior quantidade (32,71) foi obtida pela dose mais baixa 100 Gy. A irradiação gama provocaram variações morfológicas em folhas e frutos evidenciados nos dendrograma gerados. Para o acesso C14 foram formados dois agrupamentos A, com 16 indivíduos e B com três indivíduos. Para o acesso MR1 foram obtidos seis agrupamentos A, B, C, D, E e F, compondo 10, 3, 7, 4, 2 e 7 indivíduos, respectivamente. Na avaliação de resistência a M. phaseolina, a partir das notas obtidas, foram identificados fontes de resistência. Dois indivíduos derivados do acesso MR1, variou de suscetível a resistente à inoculação, e um indivíduo derivado do acesso C14 variou de moderadamente resistente a resistente, ambos os indivíduos classificados com nota 1. Usando a análise de Sequências Simples Repetidas Internas o polimorfismo genético de plantas M2 selecionadas foi investigado e observado alterações no DNA. A amplificação com o marcador ISSR 13 (TriTGT5'CY) sugere mutação para MR1-344 e C14-1111 com padrão de bandas 290pb. As doses de raios gama testadas não geraram danos fisiológicos que afetaram negativamente os processos de germinação. Além disso, mostrou a baixa sensibilidade do acesso C14 e o potencial para ser testadas com doses mais altas. Os resultados mostram a eficiência dos raios gama na geração de variabilidade, permitindo identificar indivíduos promissores para o avanço geracional e materiais com potencial de resistência.
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Na primeira etapa as sementes irradiadas M1 foram semeadas em substrato e areia, na proporção 1:1 e, mensuradas variáveis como potencial de germinação, taxa de geminação e índice de germinação. Na segunda etapa foi realizado o transplante das plantas germinadas para baldes de oito litros contendo substrato e areia, sendo quatro repetições com 15 plantas, cada. Foram avaliadas as variáveis associadas à floração, lâmina foliar e fruto. Foi utilizado o software de análises de imagens IMAGE J para a obtenção dos dados de folha e fruto e, a partir de mudanças morfológicas foram gerados dois dendrograma pelo método WARD. A partir dos frutos gerados por autofecundação, foram obtidas sementes da geração M2. A terceira e quarta etapa do experimento avaliou a resistência da geração M2 a M. phaseolina a partir da inoculação pelo palito de dente infestado com o fungo e, a análise que avalia a possível ocorrência de mutação a nível molecular a partir do uso de marcadores ISSR. A irradiação gama influenciou o potencial de germinação. A dose 100 Gy (87 %) foi superior ao controle (78,5%), em contrapartida as doses testadas não geraram efeitos na taxa de germinação, índice de germinação, o que evidencia a baixa sensibilidade dos acessos para as doses testadas. O comportamento diferencial de MR1 e C14 mostrou que o acesso MR1 é mais sensível pelo comportamento germinativo próprio do acesso com médias inferiores para todas as variáveis e na interação obteve os valores mais baixos de potencial de germinação (48%) na dose 400 Gy em relação ao controle (60%). As doses de raios gama influenciaram mudanças na floração dos acessos. A produção de flores femininas sofreu uma redução média de 39,35%, as flores masculinas tiveram um incremento com maior quantidade (39,25) na dose 300 Gy em relação ao controle (19,25). O mesmo comportamento foi observado na quantidade de flores bissexuais (0,25), anômalas (4,38), com até 4 pétalas (1,13) e anteras (3,25) com valores superiores para a dosagem de 300 Gy, e para número de flores com mais de 5 pétalas (0,50), que foi obtida pela dosagem 200 Gy. Os efeitos dos raios gama na frutificação foram evidentes na dose 400 Gy onde ser obteve menor quantidade de frutos (10,37). As doses 200 e 300 Gy (26,29 - 29,18) obtiveram uma produção semelhante, enquanto a maior quantidade (32,71) foi obtida pela dose mais baixa 100 Gy. A irradiação gama provocaram variações morfológicas em folhas e frutos evidenciados nos dendrograma gerados. Para o acesso C14 foram formados dois agrupamentos A, com 16 indivíduos e B com três indivíduos. Para o acesso MR1 foram obtidos seis agrupamentos A, B, C, D, E e F, compondo 10, 3, 7, 4, 2 e 7 indivíduos, respectivamente. Na avaliação de resistência a M. phaseolina, a partir das notas obtidas, foram identificados fontes de resistência. Dois indivíduos derivados do acesso MR1, variou de suscetível a resistente à inoculação, e um indivíduo derivado do acesso C14 variou de moderadamente resistente a resistente, ambos os indivíduos classificados com nota 1. Usando a análise de Sequências Simples Repetidas Internas o polimorfismo genético de plantas M2 selecionadas foi investigado e observado alterações no DNA. A amplificação com o marcador ISSR 13 (TriTGT5'CY) sugere mutação para MR1-344 e C14-1111 com padrão de bandas 290pb. As doses de raios gama testadas não geraram danos fisiológicos que afetaram negativamente os processos de germinação. Além disso, mostrou a baixa sensibilidade do acesso C14 e o potencial para ser testadas com doses mais altas. Os resultados mostram a eficiência dos raios gama na geração de variabilidade, permitindo identificar indivíduos promissores para o avanço geracional e materiais com potencial de resistência.This study aimed to obtain mutant melon lines in order to evaluate characteristics of resistance to the fungus Macrophomina phaseolina and to identify the potential of treatment with gamma rays to cause genetic and phenotypic changes in melon accessions from the UFERSA germplasm collection. For this, M0 seeds of two MR1 and C14 melon accessions were irradiated with five different doses (0, 100, 200, 300 and 400 Gy) of gamma radiation containing four replications. Each repetition had 25 seeds. The experiment was divided into four stages. In the first stage, the M1 irradiated seeds were sown in substrate and sand, in a 1:1 ratio, and variables such as germination potential, twinning rate and germination index were measured. In the second stage, the germinated plants were transplanted into eight-liter buckets containing substrate and sand, with four replications with 15 plants each. Variables associated with flowering, leaf blade and fruit were evaluated. The IMAGE J image analysis software was used to obtain leaf and fruit data and, based on morphological changes, two dendrograms were generated using the WARD method. From the fruits generated by self-fertilization, seeds of the M2 generation were obtained. The third and fourth stage of the experiment evaluated the resistance of the M2 generation to M. phaseolina from inoculation with a toothpick infested with the fungus, and the analysis that evaluates the possible occurrence of mutation at the molecular level from the use of ISSR markers . Gamma irradiation influenced the germination potential. The 100 Gy dose (87%) was superior to the control (78.5%), on the other hand, the tested doses did not generate effects on the germination rate, germination index, which shows the low sensitivity of the accessions for the tested doses. The differential behavior of MR1 and C14 showed that the accession MR1 is more sensitive due to the germination behavior of the accession with lower averages for all variables and in the interaction it obtained the lowest values of germination potential (48%) at the dose of 400 Gy in relation to to the control (60%). The doses of gamma rays influenced changes in accession flowering. The production of female flowers suffered an average reduction of 39.35%, male flowers had an increment with greater quantity (39.25) at the 300 Gy dose compared to the control (19.25). The same behavior was observed in the number of bisexual flowers (0.25), anomalous (4.38), with up to 4 petals (1.13) and anthers (3.25) with higher values for the 300 Gy dosage, and for number of flowers with more than 5 petals (0.50), which was obtained by dosing 200 Gy. The effects of gamma rays on fruiting were evident at the dose of 400 Gy, where the lowest amount of fruit was obtained (10,37). Doses 200 and 300 Gy (26.29 - 29.18) obtained similar production, while the highest amount (32.71) was obtained by the lowest dose 100 Gy. Gamma irradiation provoked morphological variations in leaves and fruits evidenced in the generated dendrograms. For accession C14, two groups A, with 16 individuals and B with three individuals, were formed. For accession MR1, six clusters A, B, C, D, E and F were obtained, comprising 10, 3, 7, 4, 2 and 7 individuals, respectively. In the evaluation of resistance to M. phaseolina, based on the scores obtained, sources of resistance were identified. Two individuals derived from the MR1 accession, ranged from susceptible to resistant to inoculation, and one individual derived from the C14 accession, ranged from moderately resistant to resistant, both individuals rated grade 1. Using Internal Repeated Single Sequence analysis the genetic polymorphism of plants Selected M2 was investigated and DNA changes were observed. Amplification with the ISSR 13 marker (TriTGT5'CY) suggests a mutation for MR1-344 and C14-1111 with a pattern of 290pb bands. The tested doses of gamma rays did not generate physiological damage that negatively affected the germination processes. Furthermore, it showed the low sensitivity of the C14 approach and the potential to be tested with higher doses. The results show the efficiency of gamma rays in generating variability, allowing the identification of promising individuals for generational advancement and materials with resistance potential.67 p.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESCCABrasilCentro de Ciências Agrárias - CCAUFERSAUniversidade Federal Rural do Semi-ÁridoPrograma de Pós-Graduação em FitotecniaHolanda, Ioná Santos AraújoSales Júnior, RuiHolanda, Ioná Santos AraújoNunes, Glauber Henrique de SousaAmbrósio, Márcia Michelle de QueirozBatista, Fabiane Rabelo da CostaTorres Filho, JoséSousa, Willianny Karem de2024-08-16T14:52:00Z2024-08-16T14:52:00Z2023-02-27info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesispdfapplication/pdfhttp://lattes.cnpq.br/2079609001869001http://lattes.cnpq.br/2226963304595552SOUSA, Willianny Karem de. Análise da resistência a Macrophomina phaseolina e mutação em DNA de acessos de meloeiro tratados com raios gama Co60. 2023. 67 f. Dissertação (Mestrado em Fitotecnia) - Universidade Federal Rural do Semi-Árido. Mossoró, 2023.https://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/11368MossoróAttribution-ShareAlike 3.0 BrazilUFERSAhttp://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Digital da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (RDU)instname:Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA)instacron:UFERSA2024-09-06T21:30:41Zoai:repositorio.ufersa.edu.br:prefix/11368Repositório Institucionalhttps://repositorio.ufersa.edu.br/PUBhttps://repositorio.ufersa.edu.br/server/oai/requestrepositorio@ufersa.edu.br || admrepositorio@ufersa.edu.bropendoar:2024-09-06T21:30:41Repositório Digital da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (RDU) - Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA)false
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