Avaliação das condições de cultivo e criopreservação sobre o estabelecimento de linhagens fibroblásticas de onças-pintadas, Panthera onca (LINNAEUS, 1758)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Maria Bárbara
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFERSA
Texto Completo: http://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/7048
Resumo: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
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spelling Pereira, Alexsandra Fernandeshttp://lattes.cnpq.br/8114638410593492Batista, Ana Liza Paz Souzahttp://lattes.cnpq.br/8318351869996051Silva, Herlon Victor Rodrigueshttp://lattes.cnpq.br/2748407705914248http://lattes.cnpq.br/6216720669098910Silva, Maria Bárbara2022-05-18T15:02:13Z2020-06-232022-05-18T15:02:13Z2020-04-29Silva (2020) (SILVA, 2020)http://repositorio.ufersa.edu.br/handle/prefix/7048Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESO quantitativo populacional cada vez mais reduzido de onças-pintadas, associado à sua importância ecológica, tem resultado no desenvolvimento de estratégias que promovam a sua conservação. Nesse sentido, células somáticas derivadas da pele destes animais podem ser empregadas para essa finalidade, seja na produção de embriões clones, na obtenção de células induzidas à pluripotência e nos estudos genéticos da espécie. Para tanto, o estabelecimento adequado destas amostras é etapa inicial para essas aplicações. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar os danos gerados pelas condições de cultivo in vitro e criopreservação sobre o estabelecimento de cinco linhagens fibroblásticas derivadas de onças-pintadas adultas. Assim, fragmentos da pele da região auricular apical de uma fêmea e quatro machos foram cultivados in vitro para a obtenção das células somáticas. Inicialmente, para a identificação do tipo celular, células foram confirmadas como fibroblastos após análise morfológica e de imunofluorescência, e as cinco linhagens (um animal/uma linhagem) foram submetidas a dois experimentos. No primeiro experimento, células foram avaliadas em diferentes passagens do cultivo (primeira, terceira décima) para viabilidade, metabolismo e atividade proliferativa. No segundo experimento, células criopreservadas foram avaliadas quanto a viabilidade, metabolismo, atividade proliferativa, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e apoptose após descongelação em uma, três e dez passagens de cultivo. Células não criopreservadas foram utilizadas como controle. O cultivo in vitro após a primeira (26,1 h ± 4,9), terceira (22,9 h ± 1,6) e décima passagem (22,8 h ± 3,7) e criopreservação (30,0 h ± 1,4) não afetaram a atividade proliferativa. Além disso, nenhuma diferença foi observada para a viabilidade após a primeira (98,9% ± 0,8), terceira (92,5% ± 6,2), décima (95,7% ± 1,4) passagem e criopreservação (73,2% ± 9,8). Contudo, células cultivadas até a décima passagem (49,0% ± 3,3) e criopreservadas (32,7% ± 2,8) reduziram seu metabolismo. Adicionalmente, células criopreservadas mostraram em unidades de fluorescência arbitrárias altos níveis de EROs (1,4 ± 0,1) e ΔΨm alterado (0,9 ± 0,0), quando comparados às células não criopreservadas (1,0 ± 0,1 e 1,0 ± 0,2). Finalmente, células criopreservadas e cultivadas após dez passagens reduziram a atividade proliferativa reduzida (45,1% ± 12,0) e número de células viáveis (30,4% ± 5,7), quando comparadas as células criopreservadas e cultivadas após uma e três passagens. Em conclusão, fibroblastos viáveis podem ser estabelecidos a partir da orelha de onças-pintadas e que embora essas células não tenham mostrado alterações na viabilidade e atividade proliferativa, elas sofrem danos durante um longo cultivo e criopreservação nas condições estudadasporUniversidade Federal Rural do Semi-ÁridoPrograma de Pós-Graduação em Ciência AnimalUFERSABrasilCentro de Ciências Agrárias - CCAThe increasingly small population quantity of jaguars, associated with their ecological importance, has resulted in the development of strategies that promote their conservation. In this sense, somatic cells derived from the skin of these animals can be used for this purpose, either in the production of clone embryos, in obtaining cells induced to pluripotency and in genetic studies of the species. Thus, the proper establishment of these samples is an initial step for these applications. Therefore, the aim of the present study was to assess the damage caused by in vitro culture and cryopreservation conditions on the establishment of five fibroblast lines derived from adult jaguars. Thus, fragments of skin from the apical auricular region of one female and four males were cultured in vitro to obtain somatic cells. Initially, to identify the cell type, cells were confirmed as fibroblasts after morphological and immunofluorescence analysis, and the five strains (one animal/one line) were subjected to two experiments. In the first experiment, cells were evaluated in different culture passages (first, third, tenth) for viability, metabolism and proliferative activity. In the second experiment, cryopreserved cells were evaluated for viability, metabolism, proliferative activity, levels of reactive oxygen species (ROSs), mitochondrial membrane potential (ΔΨm) and apoptosis after thawing and one, three and ten culture passages. Noncryopreserved cells were used as controls. The in vitro culture after the first (26.1 h ± 4.9), third (22.9 h ± 1.6) and tenth passage (22.8 h ± 3.7) and cryopreservation (30.0 h ± 1.4) did not affect proliferative activity. Moreover, no difference was observed for viability after the first (98.9% ± 0.8), third (92.5% ± 6.2), tenth (95.7% ± 1.4) passage and cryopreservation (73.2% ± 9.8). Nevertheless, cells cultured to the tenth passage (49.0% ± 3.3) and cryopreserved (32.7% ± 2.8) reduced their metabolism. Additionally, cryopreserved cells showed high levels of ROS (1.4 ± 0.1) and altered ΔΨm (0.9 ± 0.0) in arbitrary fluorescence units, when compared to non-cryopreserved cells (1.0 ± 0.1 and 1.0 ± 0.2). Finally, cryopreserved cells and cultured after ten passages reduced the reduced proliferative activity (45.1% ± 12.0) and number of viable cells (30.4% ± 5.7), when compared to cryopreserved and cultured cells after one and three passages. In conclusion, viable fibroblasts can be established from jaguars’ ears and that although these cells have not shown changes in viability and proliferative activity, they suffer damage during a long culture and cryopreservation under the studied conditionsSILVA, Maria Bárbara. Avaliação das condições de cultivo e criopreservação sobre o estabelecimento de linhagens fibroblásticas de onças-pintadas, Panthera onca (LINNAEUS, 1758). 2020. 79 f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal), Universidade Federal Rural do Semi-Árido, Mossoró, 2020.CC-BY-SAinfo:eu-repo/semantics/openAccessCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIAFelídeos silvestresBancos de células somáticasLinhagem celularWil felidsSomatic cell bankingCell lineAvaliação das condições de cultivo e criopreservação sobre o estabelecimento de linhagens fibroblásticas de onças-pintadas, Panthera onca (LINNAEUS, 1758)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFERSAinstname:Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA)instacron:UFERSATEXTMariaBS_DISSERT.pdf.txtMariaBS_DISSERT.pdf.txtExtracted texttext/plain146516https://repositorio.ufersa.edu.br//bitstream/prefix/7048/3/MariaBS_DISSERT.pdf.txt60e12245dc1db2497d7c003e6c47a94bMD53THUMBNAILMariaBS_DISSERT.pdf.jpgMariaBS_DISSERT.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1356https://repositorio.ufersa.edu.br//bitstream/prefix/7048/4/MariaBS_DISSERT.pdf.jpgddac45ca41cc524dd19a78c0ef8a3613MD54ORIGINALMariaBS_DISSERT.pdfMariaBS_DISSERT.pdfapplication/pdf1459933https://repositorio.ufersa.edu.br//bitstream/prefix/7048/1/MariaBS_DISSERT.pdf6c5138f5052a3817aad9f62715e80787MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81622https://repositorio.ufersa.edu.br//bitstream/prefix/7048/2/license.txtded7bce9b6f92a97818140dd73803e03MD52prefix/70482022-05-21 03:00:56.283oai:repositorio.ufersa.edu.br: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Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttps://repositorio.ufersa.edu.br/PUBhttp://bdtd.ufersa.edu.br/oai/requestdirecaosisbi@ufersa.edu.br|| direcaosisbi@ufersa.edu.bropendoar:2022-05-21T06:00:56Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFERSA - Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA)false
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