Caracterização da proteína desacopladora-1 como biomarcador imuno-histoquímico da termogênese associada à obesidade no tecido adiposo marrom
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2024 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF) |
Texto Completo: | http://app.uff.br/riuff/handle/1/32698 |
Resumo: | A obesidade causa alterações morfológicas e moleculares no tecido adiposo marrom (TAM), que, por sua vez, causam alterações metabólicas. Ademais, intervenções como treinamento aeróbico e/ou tratamento farmacológico podem atenuar os efeitos metabólicos deletérios da obesidade induzida por dieta. Estes efeitos podem ser investigados através de biomarcadores, como a proteína desacopladora-1 (UCP-1), a partir da técnica de imuno-histoquímica, como metodologia laboratorial de acompanhamento da atividade termogênica em modelo experimental de obesidade. OBJETIVO: caracterizar a UCP-1 como biomarcador imuno-histoquímico da termogênese em quadro de obesidade no TAM. MÉTODOS. Validação da UCP-1 como biomarcador tecidual, através de imuno-histoquímica, utilizando amostras de TAM oriundo de um desenho experimental de obesidade em murinos realizado previamente. Os dados foram analisados por one-way ANOVA com pós-teste Holm-Sidak, e apresentados como média ± desvio padrão. RESULTADOS. Os controles positivos e a imunomarcação para UCP-1 ocorreram dentro dos padrões esperados no TAM do grupo alimentado com dieta controle (SC). Já o grupo alimentado com dieta hiperlipídica (HF) teve menor marcação de UCP-1 em relação ao grupo SC. Enquanto as intervenções apresentaram aumento na expressão de UCP-1 em relação ao HF, principalmente, o grupo tratado com enalapril. O aumento do tempo nas etapas de bloqueio eliminou marcações inespecíficas. O polímero do kit Novolink apresentou reação cruzada com o tecido murino, sendo descartado do estudo. Já o polímero do kit DAKO mostrou especificidade aos anticorpos secundários de interesse. O TAM processado após 2 anos de fixação em formalina apresentou extenso dano tecidual e alteração de reatividade ao anticorpo. CONCLUSÃO. A UCP-1 pode ser utilizada como um biomarcador imuno-histoquímico para o acompanhamento de alterações no TAM, relacionadas à obesidade. |
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Caracterização da proteína desacopladora-1 como biomarcador imuno-histoquímico da termogênese associada à obesidade no tecido adiposo marromObesidadeTecido adiposo marrom (TAM)Proteína desacopladora-1 (UCP-1)Imuno-histoquímicaBiomarcadoresObesidadeTecido adiposo marromProteína desacopladora 1Imuno-histoquímicaTermogêneseBiomarcadoresObesityBrown adipose tissue (BAT)Uncoupling protein-1 (UCP-1)ImmunochemistryBiomarkersA obesidade causa alterações morfológicas e moleculares no tecido adiposo marrom (TAM), que, por sua vez, causam alterações metabólicas. Ademais, intervenções como treinamento aeróbico e/ou tratamento farmacológico podem atenuar os efeitos metabólicos deletérios da obesidade induzida por dieta. Estes efeitos podem ser investigados através de biomarcadores, como a proteína desacopladora-1 (UCP-1), a partir da técnica de imuno-histoquímica, como metodologia laboratorial de acompanhamento da atividade termogênica em modelo experimental de obesidade. OBJETIVO: caracterizar a UCP-1 como biomarcador imuno-histoquímico da termogênese em quadro de obesidade no TAM. MÉTODOS. Validação da UCP-1 como biomarcador tecidual, através de imuno-histoquímica, utilizando amostras de TAM oriundo de um desenho experimental de obesidade em murinos realizado previamente. Os dados foram analisados por one-way ANOVA com pós-teste Holm-Sidak, e apresentados como média ± desvio padrão. RESULTADOS. Os controles positivos e a imunomarcação para UCP-1 ocorreram dentro dos padrões esperados no TAM do grupo alimentado com dieta controle (SC). Já o grupo alimentado com dieta hiperlipídica (HF) teve menor marcação de UCP-1 em relação ao grupo SC. Enquanto as intervenções apresentaram aumento na expressão de UCP-1 em relação ao HF, principalmente, o grupo tratado com enalapril. O aumento do tempo nas etapas de bloqueio eliminou marcações inespecíficas. O polímero do kit Novolink apresentou reação cruzada com o tecido murino, sendo descartado do estudo. Já o polímero do kit DAKO mostrou especificidade aos anticorpos secundários de interesse. O TAM processado após 2 anos de fixação em formalina apresentou extenso dano tecidual e alteração de reatividade ao anticorpo. CONCLUSÃO. A UCP-1 pode ser utilizada como um biomarcador imuno-histoquímico para o acompanhamento de alterações no TAM, relacionadas à obesidade.Obesity causes morphological and molecular changes in brown adipose tissue (BAT), causing systemic metabolic changes. Furthermore, interventions such as aerobic training and/or pharmacological treatment can mitigate the deleterious metabolic effects of diet-induced obesity. These effects can be investigated through biomarkers, such as uncoupling protein-1 (UCP-1), using the immunohistochemistry technique, as a laboratory methodology for monitoring thermogenic activity in an experimental model of obesity. OBJECTIVE: to characterize the UCP-1 protein as an immunohistochemical marker of thermogenesis in obesity in BAT. METHODS. Validation of UCP-1 as tissue biomarker, through immunohistochemistry, using BAT samples from a previously carried out experimental design of obesity in murines. Data was analyzed by oneway ANOVA with Holm-Sidak post-test and presented as mean ± standard deviation. RESULTS. Positive controls and immunostaining for UCP-1 occurred within the expected standards in BAT of the standard chow group (SC). The highfat group (HF) had lower UCP-1 staining compared to the SC group. The interventions showed an increase in UCP-1 expression in relation to HF, mainly the group treated with enalapril. The increase in the time of blocking steps eliminated nonspecific staining. The polymer from the Novolink kit showed a cross-reaction with murine tissue and was discarded from the study. The polymer from the DAKO kit showed specificity to the secondary antibodies of interest. BAT processed after 2 years of formalin fixation showed extensive tissue damage and altered reactivity to the antibody. CONCLUSION. UCP-1 can be used as an immunohistochemical marker to monitor changes in BAT related to obesity.61 f.Oliveira, Nathalia Silva Carloshttp://lattes.cnpq.br/1957551354952959Frantz, Eliete Dalla Cortehttp://lattes.cnpq.br/9014043960167068Lopes, Adrianna Milagres RodriguesSantos, Clarice Machado dosSantos, Beatriz Alexandre doshttp://lattes.cnpq.br/8595500972341181Medeiros, Gabriela Rodrigues de Oliveira2024-03-20T16:45:29Z2024-03-20T16:45:29Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisapplication/pdfMEDEIROS, Gabriela Rodrigues de Oliveira. Caracterização da proteína desacopladora-1 como biomarcador imuno-histoquímico da termogênese associada à obesidade no tecido adiposo marrom. 2023. 61 f. 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