Avaliação de pureza em antivenenos de animais por sds-page e imunoblot
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF) |
Texto Completo: | http://app.uff.br/riuff/handle/1/26453 |
Resumo: | Antivenenos são imunoglobulinas tipo IgG heterólogas ou seus derivados, que neutralizam venenos de animais. No Brasil, esses medicamentos são produzidos a partir do plasma de equinos imunizados com o veneno, sendo produzidos fragmentos F(ab')2. Dentre os ensaios prescritos na Farmacopeia Brasileira (F. B.) VI Edição para a produção de soros antiveneno, não consta teste físico-químico qualitativo para avaliação de pureza desses soros, o que pode comprometer a qualidade, com possíveis contaminantes podendo desencadear reações adversas nos pacientes tratados com soroterapia. A Farmacopeia Europeia X Edição recomenda a eletroforese em gel de poliacrilamida com o tensoativo aniônico dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE) para avaliar a pureza desses produtos biológicos. Considerando esse problema, o presente trabalho consiste na avaliação da pureza de soros antibotrópicos e antiescorpiônicos utilizados no Programa Nacional de Imunizações e propõe a inclusão do ensaio de SDS-PAGE na F.B. para identificação de contaminantes proteicos. O perfil eletroforético dos lotes foi identificado por densitometria ótica e foi obtido como principal componente o fragmento F(ab')2, em torno de 100 kDa, responsável por neutralizar as toxinas do veneno em todos os lotes, além da banda característica de IgG íntegra, entre 150–200 kDa, havendo pouca variação entre os percentuais relativos para lotes do mesmo tipo de antiveneno. Utilizou-se Imunoblot por transferência úmida e com anticorpo primário de coelho contra IgG equina para confirmar as bandas da IgG íntegra e de F(ab')2. Outros contaminantes presentes apresentaram massa molar compatível com pepsina suína, albumina equina e produtos da proteólise de IgG equina por pepsina. Sugere-se que a presença de contaminantes esteja relacionada a reações adversas devido à ativação do sistema complemento. |
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Avaliação de pureza em antivenenos de animais por sds-page e imunoblotSorosAntivenenoF(ab')2IgGSDS-PAGEReações adversasPurezaContaminantesImunoglobulinaSoro antibotrópicoSoro antiescorpiônicoEletroforese em gel de poliacrilamidaImunoensaioDodecil sulfato de sódioSerumsAntivenomF(ab')2IgGSDS-PAGEAdverse reactionsPurityContaminantsAntivenenos são imunoglobulinas tipo IgG heterólogas ou seus derivados, que neutralizam venenos de animais. No Brasil, esses medicamentos são produzidos a partir do plasma de equinos imunizados com o veneno, sendo produzidos fragmentos F(ab')2. Dentre os ensaios prescritos na Farmacopeia Brasileira (F. B.) VI Edição para a produção de soros antiveneno, não consta teste físico-químico qualitativo para avaliação de pureza desses soros, o que pode comprometer a qualidade, com possíveis contaminantes podendo desencadear reações adversas nos pacientes tratados com soroterapia. A Farmacopeia Europeia X Edição recomenda a eletroforese em gel de poliacrilamida com o tensoativo aniônico dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE) para avaliar a pureza desses produtos biológicos. Considerando esse problema, o presente trabalho consiste na avaliação da pureza de soros antibotrópicos e antiescorpiônicos utilizados no Programa Nacional de Imunizações e propõe a inclusão do ensaio de SDS-PAGE na F.B. para identificação de contaminantes proteicos. O perfil eletroforético dos lotes foi identificado por densitometria ótica e foi obtido como principal componente o fragmento F(ab')2, em torno de 100 kDa, responsável por neutralizar as toxinas do veneno em todos os lotes, além da banda característica de IgG íntegra, entre 150–200 kDa, havendo pouca variação entre os percentuais relativos para lotes do mesmo tipo de antiveneno. Utilizou-se Imunoblot por transferência úmida e com anticorpo primário de coelho contra IgG equina para confirmar as bandas da IgG íntegra e de F(ab')2. Outros contaminantes presentes apresentaram massa molar compatível com pepsina suína, albumina equina e produtos da proteólise de IgG equina por pepsina. Sugere-se que a presença de contaminantes esteja relacionada a reações adversas devido à ativação do sistema complemento.Antivenoms are heterologous IgG-type immunoglobulins or their derivatives that neutralize animal venoms. In Brazil, these drugs are F(ab')2 fragments produced from venom immunized horse plasma. Among prescribed assays in Brazilian Pharmacopoeia (FB) VI Edition to produce antivenom serums, there is no qualitative physical-chemical test to assess the purity of these products, which can compromise the quality, with possible contaminants that can trigger adverse reactions in treated patients with serum therapy. The European Pharmacopoeia X Edition recommends polyacrylamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate anionic surfactant (SDS-PAGE) to assess the purity of these biologicals. The present work consists of evaluating the purity of anti-bothropic and anti-scorpion sera used in the Brazilian National Immunization Program and proposes the inclusion of the SDS-PAGE assay in the F.B. for identification of protein contaminants. Batches electrophoretic profile were identified by optical densitometry and the F(ab')2 fragment (100 kDa) responsible for neutralizing the venom toxins, were the main component, in all samples. In addition to the characteristic band of intact IgG, between 150–200 kDa, with little variation between the relative percentages for batches of the same type of antivenom. Wet immunoblot with rabbit primary antibody against equine IgG were used to confirm intact IgG and F(ab')2 bands. Other contaminants present had a molar mass compatible with porcine pepsin, equine albumin and products of proteolysis of equine IgG by pepsin. It is suggested that the presence of contaminants is related to adverse reactions due to the activation of the complement system.68 f.Universidade Federal FluminenseGouvêa, Marcos MartinsBrant, Vinnicius FerraçoCassella, Ricardo JorgensenSilva, Filipe Soares Quirino daLima, Isabel Cavaliere2022-10-11T16:07:25Z2022-10-11T16:07:25Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisapplication/pdfLIMA, Isabel Cavaliere. Avaliação de pureza em antivenenos de animais por sds-page e imunoblot. 2022. 68 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Química Industrial) - Instituto de Química, Universidade Federal Fluminense, Niterói, 2022.http://app.uff.br/riuff/handle/1/26453CC-BY-SAinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)instname:Universidade Federal Fluminense (UFF)instacron:UFF2022-10-31T16:33:18Zoai:app.uff.br:1/26453Repositório InstitucionalPUBhttps://app.uff.br/oai/requestriuff@id.uff.bropendoar:21202022-10-31T16:33:18Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF) - Universidade Federal Fluminense (UFF)false |
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