Avaliação de pureza em antivenenos de animais por sds-page e imunoblot

• Autor(a) principal: Lima, Isabel Cavaliere
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
• Texto Completo: http://app.uff.br/riuff/handle/1/26453
• topic: Soros; Antiveneno; F(ab')2; IgG; SDS-PAGE; Reações adversas; Pureza; Contaminantes; Imunoglobulina; Soro antibotrópico; Soro antiescorpiônico; Eletroforese em gel de poliacrilamida; Imunoensaio; Dodecil sulfato de sódio; Serums; Antivenom; F(ab')2; IgG; SDS-PAGE; Adverse reactions; Purity; Contaminants

Antivenenos são imunoglobulinas tipo IgG heterólogas ou seus derivados, que neutralizam venenos de animais. No Brasil, esses medicamentos são produzidos a partir do plasma de equinos imunizados com o veneno, sendo produzidos fragmentos F(ab')2. Dentre os ensaios prescritos na Farmacopeia Brasileira (F. B.) VI Edição para a produção de soros antiveneno, não consta teste físico-químico qualitativo para avaliação de pureza desses soros, o que pode comprometer a qualidade, com possíveis contaminantes podendo desencadear reações adversas nos pacientes tratados com soroterapia. A Farmacopeia Europeia X Edição recomenda a eletroforese em gel de poliacrilamida com o tensoativo aniônico dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE) para avaliar a pureza desses produtos biológicos. Considerando esse problema, o presente trabalho consiste na avaliação da pureza de soros antibotrópicos e antiescorpiônicos utilizados no Programa Nacional de Imunizações e propõe a inclusão do ensaio de SDS-PAGE na F.B. para identificação de contaminantes proteicos. O perfil eletroforético dos lotes foi identificado por densitometria ótica e foi obtido como principal componente o fragmento F(ab')2, em torno de 100 kDa, responsável por neutralizar as toxinas do veneno em todos os lotes, além da banda característica de IgG íntegra, entre 150–200 kDa, havendo pouca variação entre os percentuais relativos para lotes do mesmo tipo de antiveneno. Utilizou-se Imunoblot por transferência úmida e com anticorpo primário de coelho contra IgG equina para confirmar as bandas da IgG íntegra e de F(ab')2. Outros contaminantes presentes apresentaram massa molar compatível com pepsina suína, albumina equina e produtos da proteólise de IgG equina por pepsina. Sugere-se que a presença de contaminantes esteja relacionada a reações adversas devido à ativação do sistema complemento.