Investigação da presença do vírus do papiloma humano em células de lesões orais epiteliais proliferativas por PCR em material selecionado por microdissecção a laser

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ferraro, Cíntia Tereza Lima
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
Texto Completo: http://app.uff.br/riuff/handle/1/30252
Resumo: Contém ilustrações e tabelas
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spelling Investigação da presença do vírus do papiloma humano em células de lesões orais epiteliais proliferativas por PCR em material selecionado por microdissecção a laserPapillomavirus humanoMicrodissecção e captura a laserInfecção por papillomavirusReação em cadeia da polimeraseContém ilustrações e tabelasO vírus do papiloma humano (HPV) pertence à família Papillomaviridae, e infecta o epitélio cutâneo e/ou oral em vários vertebrados. É um vírus com o genoma constituído por ácido desoxirribonucléico (DNA) e tem desenvolvido estratégias de sobrevivência que envolve desregular o ciclo celular das células do hospedeiro. Mais de 150 subtipos diferentes de HPV foram identificados, e têm sido associados a lesões malignas e, principalmente, benignas de mucosa e pele, sendo 25 detectados em lesões orais. O objetivo desse estudo é demonstrar a associação do HPV com lesões orais proliferativas (papiloma escamoso oral, condiloma acuminado, verruga vulgar e hiperplasia epitelial focal) através da identificação do DNA do HPV por PCR em ceratinócitos selecionados por microdissecção a laser em cortes parafinados. A amostra foi constituída por 31 lesões orais provenientes de 31 pacientes em estudo retrospectivo: papiloma escamoso oral (20 lesões), condiloma acuminado oral (4 lesões), verruga vulgar (3 lesões) e hiperplasia epitelial focal (4 lesões). A microdissecção foi realizada com o sistema computadorizado Leica DM 6000 B (Leica Microsystems). Procedeu-se a extração do DNA total com o micro kit QIAmp da QIAGEN e foram amplificados como controle do DNA o éxon 7 do gene TP53 e a β-actina. A seguir, foi feito PCR para HPV utilizando a técnica de nested PCR, onde foram utilizados os pares de iniciadores genéricos MY09/MY11 e GP5+/ GP6+. A técnica de PCR foi positiva para o éxon 7 do gene TP53 em 67,7% das amostras (21 de 31), e foi positiva para a β-actina em 93,5% (29 de 31). Foi detectada a presença de DNA do HPV em 25,8% das amostras (8 de 31) e nessas lesões foram encontrados os HPV tipo 6 e tipo 11 através do sequenciamento dos produtos amplificados. Concluímos que, nas condições desse estudo, a minoria (25,8%) das lesões alvo está associada ao HPV, sendo que apenas os subtipos 6 e 11 foram encontrados. Dessa forma, o HPV tipo 13 não foi detectado nas lesões de hiperplasia epitelial focal de pacientes HIV positivos.The human papillomaviruses (HPV) belong to the Papillomaviridae family and infect the cutaneous and/or oral epithelium in various vertebrates. They are deoxyribonucleic acid (DNA) viruses and have developed survival strategies that involve disrupting the cell cycle of host cells. More than 150 different subtypes of HPV have been identified and have been associated with malignant and especially benign skin and mucosa lesions, of which 25 types have been detected in oral lesions. The aim of this study is to demonstrate the association between HPV and oral proliferative lesions (oral squamous papilloma, condyloma acuminatum, verruca vulgaris and focal epithelial hyperplasia) through the identification of HPV DNA by PCR in keratinocytes selected by laser microdissection on paraffin-embedded material. The sample consisted of 31 oral lesions from 31 patients in a retrospective study: oral squamous papilloma (20 lesions), oral condyloma acuminata (4 lesions), warts (3 lesions) and focal epithelial hyperplasia (4 lesions). The microdissection was performed with the computerized Leica DM 6000 B (Leica Microsystems) microscope. DNA extraction was performed with micro QIAmp kit (QIAGEN) and exon 7 of TP53 gene and β-actin gene were used as DNA quality control. Nested PCR was used for HPV testing, in which amplification of the generic primer pair MY09/ MY11 was followed by amplification for the GP5+/ GP6+ prime pair. The PCR was positive for exon 7 of TP53 gene in 67.7% of samples (21 of 31) and was positive for β-actin in 93.5% (29 of 31) Presence of HPV DNA was observed in 25,8% (8 of 31) of the samples and in these lesions were found HPV type 6 and type 11 by sequencing of the amplified products. In our conditions and population, a minority (25.8%) of target lesions were associated with HPV, and the HPV type 6 and 11 were the only ones found. Thus, HPV type 13 was not detected in lesions of focal epithelial hyperplasia of HIV positive patients.99 f.Canedo , Nathalie Henriques Silvahttp://lattes.cnpq.br/4295929194142461Dias, Eliane Pedrahttp://lattes.cnpq.br/4383696340593005Carvalho, Maria da Glória da Costahttp://lattes.cnpq.br/9963687547253729Cabral, Márcia Grillohttp://lattes.cnpq.br/0126423486563451Albano, Rodolpho Mattoshttp://lattes.cnpq.br/1268859650338952http://lattes.cnpq.br/5381913342283291Ferraro, Cíntia Tereza Lima2023-09-06T00:47:38Z2023-09-06T00:47:38Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfFERRARO, Cíntia Tereza Lima. Investigação da presença do vírus do papiloma humano em células de lesões orais epiteliais proliferativas por PCR em material selecionado por microdissecção a laser. 2011. 99 f. 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