Modulação da densidade e localização celular do ENT1 pelo bloqueio da ERK em culturas mistas da retina de Gallus gallus

• Autor(a) principal: Gallonetti, Bismillah Cabral Pereira de Almeida
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
• Texto Completo: http://app.uff.br/riuff/handle/1/29807
• topic: Adenosina; ERK; Transportador equilibrativo de nucleosídeos; Retina; PKA; Proteína cinase regulada por sinais extracelulares; Nucleosídeo; Neuróglia; Embrião de galinha; Adenosine; Equilibrative nucleoside transporter

A adenosina é um nucleosídeo considerado um neuromodulador, estando presente em todo o sistema nervoso central (SNC). Ela pode ser liberada e captada tanto por neurônios quanto por células gliais. As concentrações intracelular e extracelular de adenosina são reguladas pela atividade de enzimas extra e intracelulares, assim como pela atividade dos transportadores de nucleosídeos (ENTs e CNTs), sendo que o transportador equilibrativo de nucleosídeos do tipo 1 (ENT1) é o principal transportador responsável pela captação de adenosina em culturas mistas (neurônios e células gliais) de retina de galinha. A modulação de vias intracelulares de sinalização pode modificar a atividade do ENT1. Nosso modelo utilizado é a retina de embrião de galinha (espécie Gallus gallus). O objetivo deste trabalho foi entender como o bloqueio da via da ERK pelo inibidor da MEK, U0126, influencia na liberação/captação de adenosina por culturas mistas da retina de galinha e avaliar os efeitos da inibição dessa MAP quinase na expressão e localização celular do ENT1. Inibidores de outras proteínas cinases também foram analisados. Os resultados mostram que a viabilidade celular não foi afetada pelo tratamento com U0126 (10 μM), mas que induziu uma redução maior que 50% na captação de [³H]-adenosina, quando comparado ao controle. A liberação de purinas não mostrou diferenças significativas nas diferentes condições experimentais testadas. A análise da densidade proteica do lisado total celular por western blotting não mostrou diferenças nos níveis de ENT1, mas o ensaio de biotinilação mostrou uma tendência para a diminuição da expressão de ENT1 na membrana plasmática das células após a inibição da ERK. Além disso, a quantificação da co-localização de ENT1 com células neuronais e gliais não mostrou diferenças significativas do tratamento com U0126 em comparação ao controle. Os resultados mostram que a inibição da via da ERK pode estar internalizando o ENT1, mas não degradando-o e que esse efeito seria semelhante tanto nas células neuronais quanto nas células gliais.