Estudo in vitro da resistência do Trypanosoma cruzi ao benznidazol

• Autor(a) principal: Cavalcante, Ana Luiza Barbosa Godart
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
• Texto Completo: http://app.uff.br/riuff/handle/1/32578
• topic: Trypanosoma cruzi; Falha terapêutica; Resistência; Benznidazol; Nitrorredutases; Estresse oxidativo; Mitocôndria; Drogas alternativas; Trypanosoma cruzi; Resistência a medicamentos; Antiparasitários; Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Therapeutic failure; Therapeutic failure; Resistance; Benznidazole; Nitroreductases; Oxidative stress; Mitochondrion; Alternative drugs

A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é uma doença negligenciada e endêmica na América Latina. O tratamento etiológico tem como droga de primeira escolha o benznidazol (bz), um nitroderivado que apresenta eficácia variável e sérios efeitos adversos na fase crônica da doença, o que acaba levando à descontinuação da terapia. Para desempenhar sua ação tripanossomicida, o bz precisa ser metabolizado por nitrorredutases (NTR) dos tipos I e II. As do tipo I são oxigênioinsensíveis e causam dano ao DNA, enquanto as do tipo II são oxigênio-sensíveis e levam à produção de ânion superóxido. A atividade de NTR II é proposta como mecanismo de ativação de drogas nitro-heterocíclicas em tripanossomatídeos, apesar de não haver um consenso sobre a participação do estresse oxidativo na ação de bz nesses parasitos. Fatores que reduzem ou previnem esse processo de ativação do bz podem desencadear resistência, explicando as altas taxas de falha terapêutica. No entanto, os mecanismos moleculares de suscetibilidade e resistência do T. cruzi ao bz ainda não foram completamente elucidados. Neste cenário, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a suscetibilidade e resistência do T. cruzi ao bz, de forma a contribuir para a compreensão de alvos relevantes para drogas alternativas. Inicialmente, caracterizamos o envolvimento do estresse oxidativo induzido por bz em epimastigotas da cepa CL Brener. O valor de IC50/24h do bz é 25,6 ± 3,4 µM, e a pré-incubação com os antioxidantes alfa-tocoferol, n-acetilcisteína (NAC) e mitotempo mostraram que somente NAC protege os parasitos do efeito tripanocida de bz. Os ensaios com Amplex red confirmaram aumento nos níveis de H2O2 induzido por bz, produção inibida por NAC e mitotempo. Na análise do efeito ultraestrutural de bz em T. cruzi, imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão (MET) demonstraram um fenótipo de inchaço mitocondrial. Esse fenótipo foi prevenido pelo pré-tratamento com NAC, sugerindo que o dano nesta organela está relacionado a um efeito oxidativo de bz. Esses dados foram reforçados através da diminuição do potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) após incubação com bz, parcialmente protegido por NAC e mitotempo, e menor consumo de O2 mitocondrial, o qual foi preservado nos parasitos pré-tratados com mitotempo. A indução de resistência ao bz e ao H2O2 levou a um fenótipo de resistência mitocondrial, em que o ΔΨm de ambas as cepas resistentes não altera quando tratadas com o IC50/24 h de bz. Nossos resultados reforçam um papel central da mitocôndria de T. cruzi no mecanismo de ação de bz, sugerindo a participação dessa organela na resistência do parasito à droga.