Estudo do perfil inibitório da enzima nucleosídeo hidrolase para busca de compostos anti-leishmania em moringa oleifera lamarck
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF) |
Texto Completo: | http://app.uff.br/riuff/handle/1/27416 http://dx.doi.org/10.22409/PPG-CAPS.2021.m.14813429750 |
Resumo: | A leishmaniose visceral é uma doença negligenciada que proporciona altas taxas de fatalidade e é causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania. Esse protozoário depende da via de salvação de purinas para a síntese de DNA, RNA e outras moléculas metabólicas. A nucleosídeo hidrolase (NH) é uma enzima chave dessa via que catalisa a hidrólise de ligações N-glicosídicas de β-nucleosídeos, fornecendo ao parasita as bases de purina e pirimidina necessárias para sua sobrevivência. Por não ter sido identificada em mamíferos, a NH representa um potencial alvo na quimioterapia seletiva da leishmaniose. A Moringa oleifera Lamarck, planta medicinal nativa do nordeste da Índia, possui inúmeras propriedades farmacológicas, incluindo a atividade antileishmanial. Sendo assim, o trabalho teve como objetivo explorar a atividade inibitória da enzima nucleosídeo hidrolase de Leishmania donovani (LdNH) a partir dos extratos das folhas e flores de M. oleifera. Inicialmente, a enzima LdNH foi imobilizada covalentemente em partículas magnéticas (PM) e sua atividade foi monitorada pela quantificação direta da hipoxantina (produto da reação) formada por CLAE-DAD. O ensaio de atividade foi empregado na triagem de extratos das folhas e flores de M. oleifera. Os extratos hidroetanólicos (70% etanol) das flores, obtidos por infusão (FIEH) e ultrassom (FUEH), exibiram inibições de 95,5% e 95,4% a 200 μg/mL, respectivamente, apresentando valores de IC50 de 26,2 ± 4,63 μg/mL e 4,96 ± 0,52 μg/mL, nessa ordem. O extrato mais ativo (FUEH) foi investigado pelo perfil de inibição de alta resolução da LdNH, que mostrou diferentes regiões de inibição no biocromatograma (13-22 min e 25-27 min). Como o biocromatograma não indicou claramente os compostos bioativos, o ensaio de fishing de ligantes foi realizado como uma tentativa de identificação desses compostos presentes no extrato. O ensaio de fishing não resultou no isolamento dos ligantes devido às condições experimentais empregadas na etapa de eluição. No entanto, a análise comparativa do extrato bruto com os sobrenadantes da LdNH ativa e inativa após a incubação (S0) indicou picos ausentes, relacionados aos compostos retidos seletivamente em S0 com a LdNH ativa, em tempos de retenção compatíveis com as regiões de inibição apresentadas no biocromatograma. Por fim, os compostos ligantes foram identificados por CLAE-QTOF-EM como palatinose, adenosina, ácido 3-p-coumoroilquínico, ácido 4-p-coumaroilquínico, hiperosídeo, quercetina-3-O-malonil glicosídeo e kaempferol-3-O-galactosídeo. Todos os compostos foram inéditos quanto a inibição da enzima LdNH utilizando o extrato FUEH das flores de M. oleifera. |
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Estudo do perfil inibitório da enzima nucleosídeo hidrolase para busca de compostos anti-leishmania em moringa oleifera lamarckProduto NaturalMoringaEnsaio de triagemNucleosídeo HidrolasePlanta medicinalEnzimaLeishmanioseNatural ProductMoringaScreening AssayNucleoside HydrolaseA leishmaniose visceral é uma doença negligenciada que proporciona altas taxas de fatalidade e é causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania. Esse protozoário depende da via de salvação de purinas para a síntese de DNA, RNA e outras moléculas metabólicas. A nucleosídeo hidrolase (NH) é uma enzima chave dessa via que catalisa a hidrólise de ligações N-glicosídicas de β-nucleosídeos, fornecendo ao parasita as bases de purina e pirimidina necessárias para sua sobrevivência. Por não ter sido identificada em mamíferos, a NH representa um potencial alvo na quimioterapia seletiva da leishmaniose. A Moringa oleifera Lamarck, planta medicinal nativa do nordeste da Índia, possui inúmeras propriedades farmacológicas, incluindo a atividade antileishmanial. Sendo assim, o trabalho teve como objetivo explorar a atividade inibitória da enzima nucleosídeo hidrolase de Leishmania donovani (LdNH) a partir dos extratos das folhas e flores de M. oleifera. Inicialmente, a enzima LdNH foi imobilizada covalentemente em partículas magnéticas (PM) e sua atividade foi monitorada pela quantificação direta da hipoxantina (produto da reação) formada por CLAE-DAD. O ensaio de atividade foi empregado na triagem de extratos das folhas e flores de M. oleifera. Os extratos hidroetanólicos (70% etanol) das flores, obtidos por infusão (FIEH) e ultrassom (FUEH), exibiram inibições de 95,5% e 95,4% a 200 μg/mL, respectivamente, apresentando valores de IC50 de 26,2 ± 4,63 μg/mL e 4,96 ± 0,52 μg/mL, nessa ordem. O extrato mais ativo (FUEH) foi investigado pelo perfil de inibição de alta resolução da LdNH, que mostrou diferentes regiões de inibição no biocromatograma (13-22 min e 25-27 min). Como o biocromatograma não indicou claramente os compostos bioativos, o ensaio de fishing de ligantes foi realizado como uma tentativa de identificação desses compostos presentes no extrato. O ensaio de fishing não resultou no isolamento dos ligantes devido às condições experimentais empregadas na etapa de eluição. No entanto, a análise comparativa do extrato bruto com os sobrenadantes da LdNH ativa e inativa após a incubação (S0) indicou picos ausentes, relacionados aos compostos retidos seletivamente em S0 com a LdNH ativa, em tempos de retenção compatíveis com as regiões de inibição apresentadas no biocromatograma. Por fim, os compostos ligantes foram identificados por CLAE-QTOF-EM como palatinose, adenosina, ácido 3-p-coumoroilquínico, ácido 4-p-coumaroilquínico, hiperosídeo, quercetina-3-O-malonil glicosídeo e kaempferol-3-O-galactosídeo. Todos os compostos foram inéditos quanto a inibição da enzima LdNH utilizando o extrato FUEH das flores de M. oleifera.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorVisceral leishmaniasis is a neglected disease with high fatality rates and is caused by different species of protozoa of the genus Leishmania. This protozoan depends on the purine salvage pathway for the synthesis of DNA, RNA, and other metabolic molecules. Nucleoside hydrolase (NH) is a key enzyme of this pathway that catalyzes the hydrolysis of N-glycosidic bonds of β-nucleosides, providing the parasite with the purine and pyrimidine bases necessary for its survival. Because NH has not been identified in mammals, it represents a potential target in selective chemotherapy of leishmaniasis. Moringa oleifera Lamarck, a medicinal plant native to northeastern India, has numerous pharmacological properties, including antileishmanial activity. Therefore, this work aimed to explore the inhibitory activity of Leishmania donovani nucleoside hydrolase enzyme (LdNH) from M. oleifera leaf and flower extracts. Initially, the enzyme LdNH was covalently immobilized on magnetic particles (MP) and its activity was monitored by direct quantification of the formed hypoxanthine (reaction product) by HPLC-DAD. The activity assay was employed in screening extracts of M. oleifera leaves and flowers. The hydroethanolic extracts (70% ethanol) of the flowers, obtained by infusion (FIEH) and ultrasound (FUEH), exhibited inhibitions of 95.5% and 95.4% at 200 μg/mL, respectively, presenting IC50 values of 26.2 ± 4.63 μg/mL and 4.96 ± 0.52 μg/mL, in that order. The most active extract (FUEH) was investigated by high-resolution inhibition profiling of LdNH, which showed different regions of inhibition in the biochromatogram (13-22 min and 25-27 min). As the biochromatogram did not clearly indicate the bioactive compounds, the ligand fishing assay was performed as an attempt to identify these compounds present in the extract. The fishing assay did not result in the isolation of the ligands due to the experimental conditions employed in the elution step. However, comparative analysis of the crude extract with the supernatants of active and inactive LdNH after incubation (S0) indicated missing peaks, related to the compounds selectively retained in S0 with the active LdNH, at retention times compatible with the regions of inhibition shown in the biochromatogram. Finally, the ligands were identified by CLAE-QTOF-EM as palatinose, adenosine, 3-p-coumaroylquinic acid, 4-p-coumaroylquinic acid, hyperoside, quercetin-3-O-malonyl glycoside, and kaempferol-3-O-galactoside. All compounds were novel regarding the inhibition of LdNH enzyme using FUEH extract of M. oleifera flowers.135 p.Rodrigues, Silvana Viannahttp://lattes.cnpq.br/6761478529348143Moraes, Marcela Cristina dehttp://lattes.cnpq.br/4092328724086308Cardoso, Carmen Lúciahttp://lattes.cnpq.br/6570887644821453Borges, Ricardo Moreirahttp://lattes.cnpq.br/2002185460196639http://lattes.cnpq.br/6134075693106658Faria, Rachel Andrade de2022-12-22T19:02:48Z2022-12-22T19:02:48Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfFARIA, Rachel Andrade de. Estudo do perfil inibitório da enzima nucleosídeo hidrolase para busca de compostos anti-leishmania em moringa oleifera lamarck. 2021. 135 f. Dissertação (Programa de Pós-Graduação em Ciências Aplicadas a Produtos para a Saúde) – Programa de Pós-Graduação em Ciências Aplicadas a Produtos para a Saúde, Faculdade de Farmácia, Universidade Federal Fluminense, Niterói, 2021.http://app.uff.br/riuff/handle/1/27416http://dx.doi.org/10.22409/PPG-CAPS.2021.m.14813429750CC-BY-SAinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)instname:Universidade Federal Fluminense (UFF)instacron:UFF2022-12-22T19:02:52Zoai:app.uff.br:1/27416Repositório InstitucionalPUBhttps://app.uff.br/oai/requestriuff@id.uff.bropendoar:21202022-12-22T19:02:52Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF) - Universidade Federal Fluminense (UFF)false |
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A leishmaniose visceral é uma doença negligenciada que proporciona altas taxas de fatalidade e é causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania. Esse protozoário depende da via de salvação de purinas para a síntese de DNA, RNA e outras moléculas metabólicas. A nucleosídeo hidrolase (NH) é uma enzima chave dessa via que catalisa a hidrólise de ligações N-glicosídicas de β-nucleosídeos, fornecendo ao parasita as bases de purina e pirimidina necessárias para sua sobrevivência. Por não ter sido identificada em mamíferos, a NH representa um potencial alvo na quimioterapia seletiva da leishmaniose. A Moringa oleifera Lamarck, planta medicinal nativa do nordeste da Índia, possui inúmeras propriedades farmacológicas, incluindo a atividade antileishmanial. Sendo assim, o trabalho teve como objetivo explorar a atividade inibitória da enzima nucleosídeo hidrolase de Leishmania donovani (LdNH) a partir dos extratos das folhas e flores de M. oleifera. Inicialmente, a enzima LdNH foi imobilizada covalentemente em partículas magnéticas (PM) e sua atividade foi monitorada pela quantificação direta da hipoxantina (produto da reação) formada por CLAE-DAD. O ensaio de atividade foi empregado na triagem de extratos das folhas e flores de M. oleifera. Os extratos hidroetanólicos (70% etanol) das flores, obtidos por infusão (FIEH) e ultrassom (FUEH), exibiram inibições de 95,5% e 95,4% a 200 μg/mL, respectivamente, apresentando valores de IC50 de 26,2 ± 4,63 μg/mL e 4,96 ± 0,52 μg/mL, nessa ordem. O extrato mais ativo (FUEH) foi investigado pelo perfil de inibição de alta resolução da LdNH, que mostrou diferentes regiões de inibição no biocromatograma (13-22 min e 25-27 min). Como o biocromatograma não indicou claramente os compostos bioativos, o ensaio de fishing de ligantes foi realizado como uma tentativa de identificação desses compostos presentes no extrato. O ensaio de fishing não resultou no isolamento dos ligantes devido às condições experimentais empregadas na etapa de eluição. No entanto, a análise comparativa do extrato bruto com os sobrenadantes da LdNH ativa e inativa após a incubação (S0) indicou picos ausentes, relacionados aos compostos retidos seletivamente em S0 com a LdNH ativa, em tempos de retenção compatíveis com as regiões de inibição apresentadas no biocromatograma. Por fim, os compostos ligantes foram identificados por CLAE-QTOF-EM como palatinose, adenosina, ácido 3-p-coumoroilquínico, ácido 4-p-coumaroilquínico, hiperosídeo, quercetina-3-O-malonil glicosídeo e kaempferol-3-O-galactosídeo. Todos os compostos foram inéditos quanto a inibição da enzima LdNH utilizando o extrato FUEH das flores de M. oleifera. |
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