Desenvolvimento de ensaio de PCR em tempo real multiplex para a detecção simultânea dos vírus Epstein-Barr e Gammaherpesvírus humano 8 associados ao câncer

• Autor(a) principal: Medeiros, Letícia D' Ambrosio de Souza
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
• Texto Completo: http://app.uff.br/riuff/handle/1/29735
• topic: Gammaherpesvírus humano 8, vírus Epstein Barr, PCR em tempo real, PCR em tempo real multiplex; Herpesvírus humano 4, Neoplasia, Reação em cadeia da polimerase; Human Gammaherpesvírus 8, Epstein Barr virus, real time PCR, multiplex qPCR

O Gammaherpesvírus humano 8 (HHV-8) e o Gammaherpesvírus humano 4 (HHV-4/EBV) são vírus responsáveis por 2-3% dos tumores em homens, tendo sua primeira infecção em sua maioria assintomática. O Epstein-Barr (EBV) está associado ao linfoma de Burkitt, doença de Hodgkin, linfomas da célula NK/T e carcinomas de pele, gástrico e nasofaríngeo. O HHV-8 está associado a doenças como sarcoma de Kaposi, doença de Castleman e linfoma de efusão primário. A co-infecção entre os vírus HHV-8 e EBV pode aumentar a tumorigênese, formando neoplasias associadas. Deste modo, este projeto teve como objetivo desenvolver um ensaio multiplex, baseado na técnica de PCR em tempo real, para detecção dos EBV e HHV-8 em pacientes com cânceres associados, visando maior rapidez na detecção para um melhor manejo clínico dos pacientes, avaliando recaídas, resposta ao tratamento de câncer e a detecção de recidivas. Sequências de regiões conservadas de EBV (EBNA1) e HHV-8 (ORF26) disponíveis no GenBank foram avaliadas para definição das sondas e oligonucleotídeos. O desenvolvimento do PCR em tempo real multiplex foi realizado com o uso de curvas padrão sintéticas. A sensibilidade e especificidade foram avaliadas no e multiplex e foi obtido um resultado satisfatório. Os resultados foram de 100% de sensibilidade para ambos os vírus, 88% de especificidade para EBV e 100% para HHV-8. Quanto à repetitividade e a reprodutibilidade, 3 pontos da curva sintética foram avaliados e tiveram bons resultados, apresentando baixo desvio padrão. Na reprodutibilidade, os maiores desvios padrão foram: +/- 1,22 e +/- 0,58 para EBV e HHV-8, respectivamente. Já na repetitividade os maiores valores foram: +/- 1,75 para EBV e +/- 1,67 para HHV-8. Além disso, parâmetros da curva standard obtiveram bons valores. O slope obtido foi de -3,29 para EBV e -3,406 para HHV-8, o R² de 0,999 para ambos os vírus e a eficiência de 101,35% para EBV e 96,6% para HHV-8. Como resultado foi comprovado que o PCR em tempo real multiplex de EBV e HHV-8 consegue detectar ambos os Gammaherpesvírus humanos comprovando alta eficiência avaliada pelos parâmetros demonstrados.