Avaliação da atividade imunomoduladora do extrato bruto da semente de pouteria caimito (Ruiz e Pav.) Radlk e de suas frações em camundongos

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Autor(a) principal: Almeida, Renata de
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
Texto Completo: https://app.uff.br/riuff/handle/1/33791
Resumo: Introdução: Pouteria caimito é uma planta conhecida popularmente como abiu e o extrato bruto da sua semente (EBPC) ao ser administrada pela via intraperitoneal (IP), em camundongos, resulta numa leucopenia transitória e, uma redução de progenitores da linhagem linfocítica na medula óssea (MO). Hipótese: A administração do EBPC reduz o número de leucócitos circulantes e de populações celulares da medula óssea, como resultado de uma ação anti-inflamatória e/ou moduladora da resposta munológica. Objetivo Geral: Avaliar as atividades do extrato bruto de Pouteria caimito e suas frações nas respostas imunológica humoral e celular, e no modelo de hiperplasia cutânea induzida pelo óleo de cróton. Metodologia: Preparo dos extratos bruto de sementes de P. caimito (EB): extração proteica com NaCl 0.5M (EBsal) e com borato pH 10 (EBbor) seguido de fracionamento em coluna de cromatografia Sephadex G-50. Para avaliar a toxicidade aguda, camundongos receberam pela via IP diferentes concentrações dos EBs. Nos ensaios in vivo, grupos de camundongos receberam pela via IP 1000 ug/ Kg para caracterização fenotípica das células do sangue periférico (SP), baço, medula óssea (MO) e análise das fases do ciclo celular por citometria de fluxo. Na avaliação imunomoduladora os camundongos foram imunizados com 5ug de OVA associada à 2mg de hidróxido de alumínio (OVA+HA) ou OVA+HA associada ao EBsal ou EBbor e os níveis de anticorpos anti-OVA determinados pela reação de ELISA. A imunidade celular anti-OVA foi avaliada através da reação de hipersensibilidade retardada no pavilhão auricular. Para a avaliação do EB na reação inflamatória em modelo de dermatite não alérgica os animais receberam semanalmente uma instilação de óleo de cróton (OC) no pavilhão auricular durante 8 semanas e duas injeções semanais de EBbor pela via IP. Resultados: Nos ensaios in vivo com os EBs verificou-se no 40 dia, diminuição de leucócitos circulantes no SP com retorno ao nível basal no 120 dia. No baço, verificou-se uma redução de células recuperadas, assim como número de linfócitos B, no 80 dia. Por outro lado, as células T apresentaram elevações transitórias tanto na contagem relativa como na absoluta. Já na MO foram observados um aumento transitório de células recuperadas e caracterizado por uma redução do número de células B e nenhuma alteração de células T. Na análise das fases do ciclo celular, verificou-se que a administração do EBbor aumentou o percentual de células na fase subplóide ou sub G1 acompanhado da uma diminuição de células da fase G0/G1. As demais fases não foram afetadas. Os camundongos imunizados com OVA associada aos EBs apresentaram uma expressiva diminuição dos níveis de anticorpos IgG anti-OVA. A reação de hipersensibilidade tardia anti-OVA, a rejeição aguda de transplante de pele e a inflamação induzida pelo óleo de cróton não foram afetadas. Conclusões: A administração IP do EBPC em camundongos reduz células B no baço e na medula óssea sem alteração das células T. Além disso, ao ser associada na imunização reduz a produção de anticorpos. Esses achados demonstram a possibilidade de um promissor produto natural de origem vegetal com ação seletiva sobre as células B.
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spelling Avaliação da atividade imunomoduladora do extrato bruto da semente de pouteria caimito (Ruiz e Pav.) Radlk e de suas frações em camundongosGênero PouteriaSistema ImuneAnticorposPouteriaSistema ImuneAnticorpoImmune SystemGenus PouteriaantibodyIntrodução: Pouteria caimito é uma planta conhecida popularmente como abiu e o extrato bruto da sua semente (EBPC) ao ser administrada pela via intraperitoneal (IP), em camundongos, resulta numa leucopenia transitória e, uma redução de progenitores da linhagem linfocítica na medula óssea (MO). Hipótese: A administração do EBPC reduz o número de leucócitos circulantes e de populações celulares da medula óssea, como resultado de uma ação anti-inflamatória e/ou moduladora da resposta munológica. Objetivo Geral: Avaliar as atividades do extrato bruto de Pouteria caimito e suas frações nas respostas imunológica humoral e celular, e no modelo de hiperplasia cutânea induzida pelo óleo de cróton. Metodologia: Preparo dos extratos bruto de sementes de P. caimito (EB): extração proteica com NaCl 0.5M (EBsal) e com borato pH 10 (EBbor) seguido de fracionamento em coluna de cromatografia Sephadex G-50. Para avaliar a toxicidade aguda, camundongos receberam pela via IP diferentes concentrações dos EBs. Nos ensaios in vivo, grupos de camundongos receberam pela via IP 1000 ug/ Kg para caracterização fenotípica das células do sangue periférico (SP), baço, medula óssea (MO) e análise das fases do ciclo celular por citometria de fluxo. Na avaliação imunomoduladora os camundongos foram imunizados com 5ug de OVA associada à 2mg de hidróxido de alumínio (OVA+HA) ou OVA+HA associada ao EBsal ou EBbor e os níveis de anticorpos anti-OVA determinados pela reação de ELISA. A imunidade celular anti-OVA foi avaliada através da reação de hipersensibilidade retardada no pavilhão auricular. Para a avaliação do EB na reação inflamatória em modelo de dermatite não alérgica os animais receberam semanalmente uma instilação de óleo de cróton (OC) no pavilhão auricular durante 8 semanas e duas injeções semanais de EBbor pela via IP. Resultados: Nos ensaios in vivo com os EBs verificou-se no 40 dia, diminuição de leucócitos circulantes no SP com retorno ao nível basal no 120 dia. No baço, verificou-se uma redução de células recuperadas, assim como número de linfócitos B, no 80 dia. Por outro lado, as células T apresentaram elevações transitórias tanto na contagem relativa como na absoluta. Já na MO foram observados um aumento transitório de células recuperadas e caracterizado por uma redução do número de células B e nenhuma alteração de células T. Na análise das fases do ciclo celular, verificou-se que a administração do EBbor aumentou o percentual de células na fase subplóide ou sub G1 acompanhado da uma diminuição de células da fase G0/G1. As demais fases não foram afetadas. Os camundongos imunizados com OVA associada aos EBs apresentaram uma expressiva diminuição dos níveis de anticorpos IgG anti-OVA. A reação de hipersensibilidade tardia anti-OVA, a rejeição aguda de transplante de pele e a inflamação induzida pelo óleo de cróton não foram afetadas. Conclusões: A administração IP do EBPC em camundongos reduz células B no baço e na medula óssea sem alteração das células T. Além disso, ao ser associada na imunização reduz a produção de anticorpos. Esses achados demonstram a possibilidade de um promissor produto natural de origem vegetal com ação seletiva sobre as células B.Introduction: Pouteria caimito is a plant popularly known as abiu and the crude extract of the seed P. caimito (EBPC) when administered intraperitoneally (IP) in mice, results in a transient leukopenia and a reduction of progenitors of the lymphocytic lineage in the bone marrow (MO). General Objective: To evaluate the activities of Pouteria caimito crude extract and its fractions on humoral and cellular immune responses and on the model of cutaneous hyperplasia induced by croton oil. Hypothesis: The administration of EBPC reduces the number of circulating leukocytes and cell populations in the bone marrow, it is hypothesized that the extract acts as an anti-inflammatory agent and/or modulator of the immune response. EBPC. Evaluate the effect of EBPC and its fractions: on acute cytotoxicity, on the number of leukocytes in peripheral blood (SP), spleen and on OM; in the phenotype of the spleen and BM leukocyte populations; in the phases of the cell cycle of BM cells, in the humoral and cellular immune response against chicken ovalbumin (OVA), in the acute rejection of allogeneic skin transplantation and in the induction of non-allergic contact dermatitis. Methodology: Preparation of crude extracts of P. caimito (EB) seeds: protein extraction with 0.5M NaCl (EBsal) and borate pH xx (EBbor) and fractionation with Sephadex G-50 chromatography column. To assess acute toxicity, mice received different concentrations of each of the EBs via the IP route. In the in vivo assays, groups of mice received 1000 ug/Kg via IP for phenotypic characterization of SP, spleen, and MO cells and analysis of cell cycle phases by flow cytometry. In the immunomodulatory evaluation, the mice were immunized with 5ug of OVA associated with 2mg of aluminum hydroxide (OVA+HA) or OVA+HA associated with EBsal or EBbor and the levels of anti-OVA antibodies determined by ELISA reaction. Anti-OVA cellular immunity was assessed using the delayed hypersensitivity reaction in the pinna. For the evaluation of EB in the inflammatory reaction in the non-allergic dermatitis model, the animals received a weekly instillation of croton oil (OC) in the ear for 8 weeks and two weekly injections of EBbor by the IP route. Results: In the in vivo tests with the EBs, a decrease in circulating leukocytes in the SP was observed on the 40th day, with a return to the initial level on the 12th day. In the spleen, there was a reduction in recovered cells, as well as in the number of B lymphocytes, on the 8th day. On the other hand, T cells showed transient elevations in both relative and absolute counts. In MO, a transient increase in recovered cells was observed, characterized by a reduction in the number of B cells and no change in T cells. In the analysis of the cell cycle phases, it was verified that the administration of EBbor increased the percentage of cells in the subploid or sub-G1 accompanied by a decrease in G0/G1 phase cells. The other phases were not affected. Mice immunized with OVA associated with EBPC showed a significant decrease in anti-OVA IgG antibody levels. Anti-OVA delayed hypersensitivity reaction, acute skin transplant rejection and croton oil-induced inflammation were unaffected. Conclusions: IP administration of EBPC in mice reduces B cells in the spleen and bone marrow without cell alteration T. Furthermore, when associated with immunization, it reduces the production of antibodies. These findings demonstrate the possibility of a promising natural product of plant origin with selective action on B cells.112 f.Verícimo, Mauricio Afonsohttp://lattes.cnpq.br/3542098570637209Gerlinde, Agate Platais Brasil Teixeirahttp://lattes.cnpq.br/6220755242684276Tavares, Daniel Augusto Gonçalveshttp://lattes.cnpq.br/7020160917975945Pereira, Patrícia Ribeirohttp://lattes.cnpq.br/7882237239883837Costa e Silva, Maria Fernanda de SouzaKanashiro, Milton Masahikohttp://lattes.cnpq.br/5325753251589251Almeida, Renata de2024-07-30T19:36:22Z2024-07-30T19:36:22Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfALMEIDA, Renata de. Avaliação da atividade imunomoduladora do extrato bruto da semente de pouteria caimito (Ruiz e Pav.) Radlk e de suas frações em camundongos. 2023. 112 f. 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