Imobilização enzimática para aplicações analíticas em fluxo

• Autor(a) principal: Matos, Renato Camargo
• Data de Publicação: 2008
• Outros Autores: Delage, Diego Teixeira, Franchini, Rômulo Augusto de Abreu, Matos, Maria Auxiliadora Costa
• Tipo de documento: Artigo de conferência
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFJF
• Texto Completo: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9682
• topic: CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA; -

O mel é uma mistura de néctar e extrato sacarínico extraído de flores. É composto de 80% de carboidratos (35% glicose, 40% frutose e 5% sacarose) e 20% de água. O mel detém características bactericidas e antifúngicas, com propriedades cicatrizantes. O efeito antibacteriano do mel está associado a fatores “não-peróxidos” (Osmolaridade; Lisozimas Ácidos Fenólicos, Flavonóides e Acidez) e a um fator ligado à presença de peróxido de hidrogênio. O H2O2 é gerado pela oxidação da glicose pela glucose oxidase encontrada nas glândulas hipofaríngeas das abelhas. Neste trabalho propomos um novo método analítico para a quantificação dos níveis H2O2 em 12 amostras de mel (eucalipto(2), silvestre(2), laranjeira(2), assa-peixe(2) manuka, cipó-uva, ulmo e morrão de candeia), a fim de identificarmos a correlação do teor de H2O2 com a origem floral e sua atividade antibacteriana. O método é baseado na oxidação seletiva do H2O2 usando um reator tubular contendo a enzima peroxidase (PEO) imobilizada. O procedimento analítico para a imobilização da enzima peroxidase na resina amberlite IRA-743 é rápido e muito simples, o qual já foi aplicado pelo grupo na imobilização de outras enzimas, tais como, glucose oxidase3 e uricase. Com um sistema de análise de injeção em fluxo (FIA) e o reator enzimático citado, foi determinado on-line os teores de H2O2 através de medidas amperométricas diferenciais usando como eletrodo de trabalho um eletrodo de ouro modificado com platina, com um potencial aplicado de +0,60V vs Ag/AgCl(sat), e como eletrodo auxiliar um eletrodo de platina. A medida diferencial consiste no mínimo de três medidas: a) mel mais padrão de H2O2, sem reator; b) mel sem reator e c) mel com reator. A diferença entre o primeiro e segundo pico consiste na ioxidação referente ao padrão de H2O2 adicionado mais interferentes e a diferença entre o segundo e terceiro pico consiste na ioxidação correspondente à concentração de H2O2 na amostra de mel. O sistema de injeção é constituído de bomba de ar de aquário, válvula de compressão, loop de amostragem, reator tubular com PEO imobilizada, eletrodos e um potenciostato (m-Autolab). Uma taxa de fluxo de 1,5 mL.min-1 e um volume de amostra de 150 ¼L foram utilizados. A curva analítica mostrou proporcionalidade entre ioxidação e H2O2 para sucessivas injeções do analito na faixa de 0,5 à 10 µmol.L-1, com uma equação linear obtida (i(nA) = 4,5779 + 16,551H2O2(µmol/L)), um coeficiente de correlação de 0,9978 e limite de detecção de 0,29 µmol.L-1. As concentrações de H2O2 nas amostras de mel variaram de 0,43 à 21,4 x 10-3 % (m/m). Testes de recuperação obtiveram valores entre 85 e 98%. A alta sensibilidade fornecida pela técnica, combinada a atividade elevada da PEO imobilizada na resina (Amberlite IRA-743), permitiu a detecção de H2O2 em amostras de mel. Os resultados obtidos neste trabalho foram equivalentes aos encontrados com métodos espectrofotométricos.