Desenvolvimento e avaliação de método molecular baseado em PCR multiplex para detecção de genes de resistência a antimicrobianos relevantes para o controle da mastite bovina

• Autor(a) principal: Almeida, Paula Aparecida Azevedo
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFJF
• Texto Completo: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/8296
• topic: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA; Resistência a antibióticos; Mastite bovina; PCR multiplex; Streptococcus; Staphylococcus; Genes de resistência; Resistance to antibiotics; Bovine mastitis; PCR multiplex; Streptococcus; Staphylococcus; resistance genes

A mastite bovina é uma doença caracterizada pela inflamação da glândula mamária e é considerada a principal enfermidade de rebanhos leiteiros no mundo, sendo a que causa os maiores prejuízos econômicos ao setor lácteo. Embora inevitável, o uso de antibióticos para o controle dessa doença pode levar à emergência de linhagens resistentes e deixar resíduos no leite, sendo necessário então, que estes medicamentos sejam usados de forma racional. Com a finalidade de se desenvolver ensaios aprimorados, rápidos e específicos para estudos epidemiológicos, bem como para o diagnóstico da mastite bovina, métodos moleculares têm sido crescentemente estudados objetivando diminuir o tempo necessário para emissão de resultados. Considerando a escassez de dados sobre resistência a antibióticos em patógenos da mastite no Brasil e que resistência a antibióticos é um fenômeno genético, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar um método baseado em PCR multiplex para detectar os principais genes envolvidos na resistência dos patógenos Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae aos principais antibióticos comercializados no Brasil para o tratamento de mastite bovina: tetraciclina (genes tetO, tetK, tetM), eritromicina (gene ermB), gentamicina (gene aacA-aphD) e penicilina (gene blaZ). Um método baseado em PCR multiplex foi desenvolvido para amplificação de todos os marcadores supramencionados e também do gene mecA, que codifica resistência à meticilina/oxacilina e é marcador de multirresistência a antibióticos. Em avaliações preliminares do limite de detecção do ensaio foi demonstrada a necessidade de pelo menos 0,4 ng/μL de DNA bacteriano na reação para que todos os marcadores sejam amplificados simultaneamente. As forças de coincidência (índice Kappa) dos resultados de amplificação utilizando os conjuntos de oligonucleotídeos propostos no presente trabalho, por PCR monoplex e multiplex, dos genes tetO, ermB, mecA, blaZ, tetK e tetM variaram de 84% a 100%, enquanto que dados referentes ao gene aacA-aphD demonstraram uma força de coincidência leve (11%). O método desenvolvido no presente trabalho poderá ser usado para detectar marcadores moleculares de resistência a antibióticos relevantes para estudos epidemiológicos e para controle da mastite bovina no Brasil. Estudos adicionais serão realizados visando à melhoria, adaptação e validação do ensaio para a detecção destes marcadores em amostras de leite bovino.