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Anderson MiyoshiVanessa Bastos Pereira2019-08-09T22:43:47Z2019-08-09T22:43:47Z2014-07-28http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9N6JV2O uso de bactérias não patogênicas, como as bactérias lácticas (BL), constitui uma alternativa atrativa e segura para a entrega de vacinas de DNA pela via oral. Lactococcus lactis, uma BL modelo, é considerada GRAS (Generally Recognized As Safe) e, portanto, tem sido amplamente utilizada para a produção e entrega de antígenos e citocinas ao nível de mucosas. Desta forma, L. lactis surge como uma alternativa atrativa para a veiculação de vacinas de DNA. Assim, acredita-se que o uso da linhagem invasiva de L. lactis, expressando o gene FnBPA (Fibronectin binding protein A) de Staphyloccocus aureus, contendo o vector pValac, para a expressão eucariótica do antigénio ESAT-6 (6-kDa early secreted antigenic target) de Mycobacterium tuberculosis, pode representar uma nova estratégia para o controle da tuberculose; uma doença infecciosa que afeta, na sua forma latente, 1/3 da população mundial. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo a utilização de L. lactis FnBPA(pValac:ESAT-6) para a imunização de camundongos e avaliação da resposta imunológica gerada por esta nova estratégia vacinal. Para isto, a linhagem L. lactis FnBPA(pValac:ESAT-6) foi utilizada para a realização de experimentos de imunização oral em camundongos BALB/c, a fim de caracterizar o perfil da resposta imune gerada. Após a imunização, os níveis de citocinas e imunoglobulinas foram medidos por Ensaio Imunoenzimático (ELISA), onde foi verificado uma elevada produção de IFN- pelos esplenócitos murinos imunizados com a linhagem L. lactis FnBPA(pValac:ESAT-6), demonstrando uma resposta imune do tipo Th1, necessária na imunização contra a infecção por M. tuberculosis. Além disto, foi possível detectar a presença de sIgA anti- ESAT-6 no extrato das fezes e cólon dos animais, evidenciando uma resposta imune de mucosas após imunização com a linhagem L. lactis FnBPA(pValac:ESAT-6). Sendo assim, este trabalho constitui o primeiro passo rumo à validação desta nova vacina de DNA baseada em BL geneticamente modificadas.ABSTRACT The use of non-pathogenic bacteria, such as lactic acid bacteria (LAB), constitutes an attractive and safer alternative for plasmid DNA vaccine deliver by oral route. Lactococcus lactis, the model BL, is considered GRAS (Generally Recognized As Safe) and, therefore, has been extensively used for the production and delivery of antigens and cytokines at the mucosal level. Now, L. lactis arises as an attractive alternative for the delivery of plasmid DNA vaccines. Thus, it is believed that the use of the invasive L. lactis FnBPA (Fibronectin Binding Protein A) strain, containing the pValac vector, for eukaryotic expression of the ESAT-6 antigen (6-kDa Early Secreted Antigenic Target) of Mycobacterium tuberculosis, could represent a new strategy for controlling Tuberculosis; an infectious disease that affects, in its latent form, 1/3 of the worlds population. Thus, this study aimed to use L. lactis FnBPA (pValac:ESAT-6) to immunize mice and evaluation of immune response generated by this vaccine strategy. Thus, the strain L. lactis FnBPA (pValac:ESAT-6) was used for conducting an oral experiment immunization in BALB/c mice in order to know the profile of the immune response generated. Thus, following immunization, the levels of cytokines and immunoglobulins were measured by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), where was high IFN- production by spleen mice immunizated by the strain L. lactis FnBPA(pValac:ESAT-6), statistically different from controls, denoting a Th1 type immune response, needed for immunization against M. tuberculosis infection. Moreover, it was possible to detect the presence of anti-ESAT-6 sIgA in the extract of colon and faeces of the animals, demonstrating a mucosal immune response after immunization with L. lactis FnBPA (pValac: ESAT-6). Thus, this work constitutes the first step towards validation of this new DNA vaccine based on genetically modified LAB.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGLactococcus lactisSistema de entrega de DNATuberculoseGenéticaProteína recombinanteVacinas de DNAGenéticaUtilização da linhagem invasiva Lactococcus lactis FnBPA como veículo para a entrega, via mucosas, do plasmídeo vacinal pValac, codificando o antígeno ESAT-6 de Mycobacterium tuberculosis à camundongos BALB/c e avaliação do perfil imunológico gerado por essa nova formulação vacinalinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtese_vb_corre__o_final_p_s_defesa.pdfapplication/pdf4762430https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9N6JV2/1/tese_vb_corre__o_final_p_s_defesa.pdf04fb2b78cc4f934cdf30d02b7d295e1aMD51TEXTtese_vb_corre__o_final_p_s_defesa.pdf.txttese_vb_corre__o_final_p_s_defesa.pdf.txtExtracted texttext/plain542429https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9N6JV2/2/tese_vb_corre__o_final_p_s_defesa.pdf.txt7546c4743c005efe8899471b7ba2c2eeMD521843/BUOS-9N6JV22020-01-29 16:38:14.594oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-9N6JV2Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2020-01-29T19:38:14Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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