Efeitos do fármaco salicilato de sódio sobre o ramo da via de resposta a proteínas mal dobradas mediado pelo fator de transcrição ATF6α

• Autor(a) principal: Fernanda Lins Brandão Mügge
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/33887
• topic: Biologia Celular; Biologia Celular; Estresse do Retículo Endoplasmático; Fator 6 Ativador da Transcrição; Salicilato de Sódio

O retículo endoplasmático (RE) é uma organela celular responsável pela síntese e modificações pós-traducionais de muitas proteínas, tanto aquelas que permanecem nas células como outras que são secretadas. Perturbações da homeostase do RE ocasionadas pelo acúmulo de proteínas mal dobradas dá início à resposta ao estresse do RE, que é mediada por três proteínas transmembrana do RE: PERK, ATF6 e IRE1. A ativação dessa resposta leva a célula a interromper a tradução de novas proteínas e a iniciar um programa de ativação transcricional de genes que irão aumentar a capacidade da célula de dobrar ou degradar as proteínas mal dobradas. PERK e IRE1 são ativadas por oligomerização e fosforilação, enquanto que a ativação de ATF6 ocorre após esta proteína ser transportada do RE para o complexo de Golgi, onde ela é clivada sequencialmente pelas proteases S1P e S2P, gerando um fator de transcrição ativo que é translocado para o núcleo da célula. Evidências indicam que fármacos da classe dos salicilatos, como aspirina e salicilato de sódio (NaSal), são capazes de ativar PERK mas não IRE1. Uma vez que o papel de ATF6 nas respostas celulares induzidas pelos salicilatos não havia sido investigado, nosso objetivo principal neste trabalho foi caracterizar a expressão e ativação de ATF6 em células tratadas com NaSal. A expressão de ATF6 foi avaliada por meio de PCR quantitativa em tempo real e western blot e sua ativação foi avaliada por meio de ensaios de gene repórter de luciferase, microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. Descobrimos que o tratamento das células com NaSal leva a um aumento dos níveis de RNA mensageiro e da proteína ATF6α, mas esses eventos não são acompanhados da ativação de ATF6. Por outro lado, o tratamento com NaSal inibiu a ativação transcricional de ATF6 induzida por diferentes agentes indutores de estresse do RE em diferentes tipos celulares. Mecanisticamente, nas células tratadas com NaSal, ATF6α permanece localizado no complexo de Golgi, o que parece impedir a sua clivagem por S1P/S2P e consequente translocação da sua forma ativa para o núcleo, prejudicando assim a expressão de diversos genes alvos de ATF6α. Neste estudo descrevemos ATF6α como um novo alvo para as ações biológicas do salicilato de sódio, que é capaz de restringir a ativação de ATF6α e inibir a expressão de um conjunto específico de genes responsivos ao estresse do RE