Efeitos do fármaco anti-inflamatório salicilato de sódio sobre a expressão e ativação do fator de transcrição ATF6: implicações sobre a resposta celular ao estresse do retículo endoplasmático

• Autor(a) principal: Fernanda Lins Brandao Mugge
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A2GG5S
• topic: Biologia Celular; Salicilato de sódio; Retículo endoplasmático; Morfologia; Homeostase; Agentes antiinflamatórios

Perturbações da homeostase do retículo endoplasmático (RE) levam à ativação do estresse do retículo endoplasmático, que é mediada por três proteínas transmembrana, denominadas PERK, ATF6 e IRE1. Diversas evidências indicam que fármacos antiinflamatórios não-esteróides de diversas classes, como os salicilatos Aspirina e salicilato de sódio (NaSal) podem afetar a atividade de genes e proteínas relacionadas ao estresse do RE. O tratamento de células com NaSal leva à ativação de PERK, porém não de IRE1, resultando na fosforilação de eIF2. Uma vez que o papel de ATF6 nas respostas celulares induzidas pelos salicilatos não foi ainda elucidado, nosso objetivo foi caracterizar a expressão e a atividade de ATF6 em fibroblastos embrionários murinos (MEFs) tratados com salicilato de sódio. Através de experimentos de RT-qPCR e western blot, a expressão de ATF6 foi investigada após o tratamento das células. Adicionalmente, os níveis de mRNA e de proteína foram avaliados em células deficientes da eIF2 cinase PERK. Ensaios de gene repórter de luciferase foram empregados para avaliar a atividade transcricional de ATF6 em células tratadas somente com salicilato ou pré-tratadas com salicilato e posteriormente com tunicamicina. Nós observamos que o NaSal induz um aumento na expressão do mRNA e da proteína de ATF6 em células selvagens. Ainda, uma expressão robusta do mRNA de ATF6 foi observada em células deficientes de PERK, apesar de não ter sido observado acúmulo da proteína nessas células. Curiosamente, o aumento dos níveis de mRNA e de proteína não foi acompanhado do aumento da atividade transcricional de ATF6 em células tratadas com NaSal. Ademais, o pré-tratamento com NaSal levou à inibição da atividade transcricional induzida pela tunicamicina. A avaliação da expressão de genes alvo de ATF6 indica que CHOP e GADD34 têm sua expressão induzida pelo NaSal, porém a expressão dessas moléculas não é dependente de ATF6. Esses resultados fornecem evidências adicionais que os salicilatos exercem efeitos significativos sobre a expressão e ativação de componentes do estresse do RE e nos permitem ainda definir ATF6 como um novo alvo para a ação biológica dos salicilatos.