Análise da expressão dos fatores de crescimento fibroblásticos 2, 3 e 4 durante a odontogênese de molares do gambá Didelphis albiventris, um modelo promissor para estudos em biologia do desenvolvimento

• Autor(a) principal: Íria Gabriela Dias dos Santos
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/33817
• topic: Biologia Celular; Biologia Celular; Biologia do Desenvolvimento; Odontogênese; Fatores de Crescimento de Fibroblastos

O processo de odontogênese é guiado por uma cascata de sinalização na qual inúmeras moléculas, como os fatores de crescimento fibroblástico 2, 3 e 4 (FGF2, FGF3 e FGF4), garantem o desenvolvimento dos grupos dentários. A maioria dos dados sobre a odontogênese advém de roedores, que não possuem todos os grupos dentários. O gambá Didelphis albiventris é um mamífero marsupial com dentição mais próxima à humana. Além disso, a odontogênese nesta espécie ocorre nos neonatos já no marsúpio, facilitando o acesso e a coleta de amostras para o estudo da formação dos dentes. O objetivo deste estudo foi determinar o padrão de expressão de FGF2, FGF3 e FGF4 durante a odontogênese de D. albiventris. Para isso, neonatos de D. albiventris foram coletados e processados para seguintes análises: (1) histológica, para caracterizar morfologicamente a odontogênese de molares de D. albiventris; (2) de imunolocalização, para caracterizar o padrão de expressão de FGF2, FGF3 e FGF4 durante a odontogênese nesta espécie de gambá; e (3) de expressão gênica, para clonar e sequenciar essas moléculas de interesse no gambá, além de permitir a caracterização do padrão de expressão dos RNAm para FGFs, por hibridização in situ. A análise histológica foi realizada por coloração HE; e a imunolocalização dos FGFs foi realizada por imunoperoxidase indireta. Para a análise de expressão gênica, oligonucleotídeos foram construídos com base na sequência conhecida de Monodelphis domestica, o marsupial mais próximo com genoma sequenciado. Oligos foram desenhados para amplificar fragmentos de FGF3 e FGF4 (uma vez que FGF2 já havia sido sequenciado anteriormente). A sonda de RNA antisenso foi sintetizada in vitro, com marcação para digoxigenina. A análise histológica das fases da odontogênese mostrou que o gambá D. albiventris possui as mesmas estruturas presentes em roedores, nos mesmos estágios da odontogênese, além de apresentar uma lâmina dentária secundária vestigial. A imunohistoquímica permitiu a observação de FGF2, FGF3 e FGF4 em um maior número de estruturas dentárias em relação à literatura referente a roedores, sugerindo um papel mais amplo dessas moléculas no gambá. Não foi possível amplificar FGF3 de D. albiventris, sugerindo diferenças nas sequências entre as espécies de gambás. O fragmento de FGF4 foi clonado e sequenciado. O clone também serviu como molde para a síntese da sonda de RNA antisenso, utilizada na hibridização in situ. O padrão de expressão indicou a presença de FGF4 no germe dentário, tecido conjuntivo, musculatura esquelética, cartilagem, epitélio, fígado e tecido nervoso. O conhecimento da sinalização que determina a odontogênese em um modelo animal com dentição completa pode contribuir para o desenvolvimento de terapias para a reposição de dentes perdidos. Este estudo ainda representa mais um passo no conhecimento dessa espécie de gambá e na sua implementação para estudos em Biologia do Desenvolvimento