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Lucas Antonio Miranda FerreiraAna Paula Salles Moura FernandesLeiliane Coelho AndreMaria Rita Scotti Muzzi M LeitaoEryvaldo Sócrates Tabosa do EgitoMiriam Conceicao de Souza TestasiccaAndré Gustavo Tempone CardosoDelia Chaves Moreira dos Santos2019-08-14T02:51:58Z2019-08-14T02:51:58Z2016-07-28http://hdl.handle.net/1843/BUOS-B4SLB6A anfotericina B (AmB), fármaco de segunda escolha para o tratamento da leishmaniose visceral (LV), possui atividades antifúngica e antiparasitária de amplo espectro. No entanto, sua formulação convencional (C-AmB), a qual a AmB está associada ao desoxicolato de sódio, apresenta elevada toxicidade. Várias reações adversas estão associadas ao uso desta formulação, sendo a nefrotoxicidade e anemia as maiores limitações ao tratamento. Formulações lipídicas, como as nanoemulsões (NE), constituem uma alternativa interessante para contornar tais obstáculos. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo otimizar, caracterizar, avaliar os efeitos tóxicos in vitro e in vivo e a atividade de NE contendo AmB (NE-AmB) em camundongos BALB/c experimentalmente infectados com Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. A NE foi caracterizada pelo tamanho, índice de polidispersão (IP) e eficiência de encapsulação do fármaco (EE). A atividade hemolítica in vitro induzida pelas formulações de AmB foi avaliada pelo contato de células sanguíneas vermelhas. Os estudos de atividade em modelo murino de LV, a C-AmB e NE-AmB (1 ou 2 mg/kg/dia) foram administradas, por via intravenosa, em 5 dias alternados. Os estudos de toxicidade in vivo foram conduzidos em camundongos sadios, utilizando AmB (1 mg/kg) em 3 dias alternados. Análises bioquímicas (uréia nitrogenada (BUN) e creatinina) e histopatológicas foram realizadas, além das análises metabolômicas do plasma em 3 diferentes técnicas analíticas acopladas a espectrometria de massas (MS). Após aumentos gradativos na pressão no homogeneizador de alta pressão (HAP), a NE apresentou diâmetro dos glóbulos (~140 nm) e valores de IP < 0.2, inferiores aos obtidos anteriormente e EE próximo a 100%. A atividade hemolítica in vitro de C-AmB foi muito maior do que aquela observada para a NE-AmB. A NE-AmB e C-AMB, ambas a 1 mg/kg, reduziram significativamente a carga parasitária no fígado e baço em comparação com o controle, mas diferenças entre as duas formulações foram observadas somente quando a NE-AmB foi administrada a 2 mg/kg sem qualquer efeito agudo, ao contrário da C-AmB, a qual foi letal nessa dose. Os valores de BUN, creatinina e as análises histopatológicas não revelaram quaisquer alterações nas funções renais. Nas análises metabolômicas, observou-se que no grupo tratado com C-AmB, as vias metabólicas, como as dos ácidos graxos poliinsaturados e do ácido araquidônico, foram as mais afetadas, sugerindo que a C-AmB pode estar associada a processos inflamatórios, stress oxidativo e isquemia renal. Estes dados demonstraram que a NE-AmB apresentou menor efeitos tóxicos in vitro e in vivo e apresentou eficácia in vivo, se constituindo, portanto, numa alternativa promissora para o tratamento da LVAmphotericin B (AmB), a second choice drug for the treatment of visceral leishmaniasis (VL), has a broad-spectrum of antifungal and antiparasitic activity. However, its conventional formulation (C-AmB), in which the AmB is associated to sodium deoxycholate, has high toxicity. Several adverse reactions have been linked to this formulation, like nephrotoxicity and anemia, and they are the major limitations for the treatment. Lipid formulations, such as nanoemulsions (NE), became an interesting alternative to overcome these drawbacks. Therefore, this study aimed to optimize, to characterize, to evaluate the in vitro toxic effects and to evaluate in vivo toxicity and activity of the AmB-loaded NE (NE-AmB) in BALB/c mice experimentally infected with Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. The NE was characterized by the size, the polydispersity index (PI), and the drug encapsulation efficiency (EE). The hemolytic activity in vitro induced by AmB formulations was evaluated by their contact with red blood cells. The activity studies in a murine model of VL, C-AmB and NE-AmB (1 or 2 mg/kg/day) were administered intravenously on 5 alternate days. The in vivo toxicity studies were conducted in healthy mice, using AmB (1 mg/kg) on 3 alternate days. Biochemical analysis, blood urea nitrogen (BUN) and creatinine, and histopathology were carried out. Metabolomic analysis of the plasma on 3 different platforms coupled to mass spectrometry (MS) were also performed. After gradual increases in pressure in High Pressure Homogenizer (HAP), the NE had the droplet diameters (~ 140 nm) and PI values < 0.2, lower than those obtained previously and the EE close to 100%. The in vitro hemolytic activity of C-AmB was much higher than that observed for the NE-AmB. NE-AmB and C-AMB, both at 1 mg/kg, have reduced significantly the parasite burden in liver and spleen compared to the control, but differences between the two formulations were only observed when the NE-AmB was administered at 2 mg/kg without any sign of acute toxicity, unlike the C-AmB which proved to be lethal at this dose. BUN values, creatinine and histopathological analysis revealed no changes in kidney function. In metabolomics analysis, it was observed that the most affected metabolic pathways were the polyunsaturated fatty acids and arachidonic acid in the group treated with C-AmB, suggesting that this formulation may be associated with inflammatory processes, oxidative stress and renal ischemia. These data showed that the NE-AmB was able to reduce the toxic effects in vitro and in vivo and to show efficacy in vivo, revealing, therefore, to be a promising alternative for the treatment of VLUniversidade Federal de Minas GeraisUFMGNanoemulsõesLeishmaniose visceralToxicidadeMetabolômicaAnfotericina BNanotecnologiaNanoemulsõesAtividade em modelo animalLeishmaniose visceralMetabolômicaAnfotericina bEfeitos tóxicosAvaliação da toxicidade e eficácia de nanoemulsões contendo Anfotericina B para o tratamento da Leishmaniose Visceralinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtese_d_lia_final_set_2016.pdfapplication/pdf2974879https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-B4SLB6/1/tese_d_lia_final_set_2016.pdf165bc3e6efe0a595091e663f8662efbaMD51TEXTtese_d_lia_final_set_2016.pdf.txttese_d_lia_final_set_2016.pdf.txtExtracted texttext/plain224733https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-B4SLB6/2/tese_d_lia_final_set_2016.pdf.txtc6f959e960d25edae4d88335498d3e2bMD521843/BUOS-B4SLB62019-11-14 13:46:17.573oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-B4SLB6Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T16:46:17Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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