Caracterização das interações protéicas envolvidas no tráfego celular do transportador de colina de alta afinidade - CHT1

• Autor(a) principal: Stefany Fontes Domingues
• Data de Publicação: 2006
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-6W7NGY
• topic: Farmacologia Bioquímica e Molecular; Acetilcolina; Mecanismos colinérgicos; Farmacologia; Farmacologia molecular; Neurorreguladores

O transportador de colina de alta afinidade (CHT1) é responsável por recaptar a colina presente na fenda sináptica, proveniente da degradação da acetilcolina (ACh), em neurônios colinérgicos. Sua atividade é de grande importância uma vez que neurônios colinérgicos têm uma baixa capacidade para síntese de novo de colina. Embora seja um transportador de membrana plasmática, o CHT1 encontra-se em reciclagem contínua entre vesículas intracelulares e a membrana plasmática em modelos celulares neuronais. O tráfego celular parece ter um importante papel na regulação da atividade desse transportador. Em nosso trabalho procuramos identificar proteínas que poderiam interagir com o CHT1 através do sistema de duplo híbrido em leveduras. Verificamos a interação do transportador com BRI3, Flotilina, SEC14like e MAP1A. Essas proteínas têm em comum a participação em eventos de tráfego celular. No intuito de caracterizar de maneira mais profunda essas interações, escolhemos a proteína SEC14like para dar continuidade aos nossos experimentos. SEC14like é homóloga à proteína SEC14 de levedura, cuja função é essencial para o transporte de proteínas através do complexo de Golgi de leveduras, além de ter papel importante na síntese e metabolismo de fosfatidilinositol e fosfatidilcolina. Em humanos, SEC14like é uma proteína ainda pouco descrita. Utilizamos co-imunoprecipitação, microscopia confocal e experimentos de transporte de colina para delinear com mais clareza a relevância da interação CHT1-SEC14like. Através de ensaios de co-imunoprecipitação, verificamos que essa interação ocorre em células de mamíferos. Observamos também, utilizando microscopia confocal que o padrão de distribuição do transportador foi modificado em células que superexpressam SEC14like. A análise da captação de colina, sugere que a superexpressão de SEC14like, altera a atividade do transportador, diminuindo em torno de 30% a taxa de transporte de colina. Esses dados sugerem uma nova possibilidade de regulação da atividade colinérgica, envolvendo uma proteína de importância no tráfego celular e o CHT1.