Avaliação da inibição da atividade da fosfolipase citoplasmática A2 (cPLA2) sobre o ciclo de multiplicação do Vaccinia virus

• Autor(a) principal: Luís Filipe Zandonadi Guimarães
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/42307
• topic: Vaccinia virus; Fosfolipases; cPLA2; Lipídeos de membrana; Morfogênese viral; Microbiologia; Vírus Vaccinia; Fosfolipases A2 Citosólicas; Lipídeos de Membrana

O Vaccinia virus (VACV), protótipo da família Poxviridae, é um vírus envelopado que realiza seu ciclo multiplicativo inteiramente no citoplasma da célula do hospedeiro. Ao longo de seu ciclo de multiplicação o VACV produz dois tipos diferentes de vírions que são classificados de acordo com o número de envelopes lipídicos que apresentam e com sua localização celular: os vírus maduros intracelulares (IMVs), que possuem um único envelope lipoproteico, e os vírus extracelulares (EVs), que possuem um envelope lipídico adicional. A existência de duas formas envelopadas do VACV exige do hospedeiro uma intensa biogênese e rearranjo de lipídios para suprir a demanda do vírus por lípides de membrana. A fosfolipase A2 citosólica (cPLA2) é uma enzima lipolítica que está envolvida no “turnover” fosfolipídico, remodelação de membranas e produção de segundos mensageiros que atuam nas vias sinalizadoras celulares e na resposta imune do hospedeiro, e, por estes motivos, pode estar relacionada com a morfogênese dos vírions formados ao longo do ciclo de multiplicação do VACV. Com o objetivo de confirmar esta hipótese, avaliou-se, inicialmente, se o vírus era capaz de alterar na célula hospedeira o padrão de ativação (fosforilação) da cPLA2, e foi verificado que o mesmo induz um aumento na ativação desta proteína (conversão da cPLA2 em P-cPLA2) por um mecanismo dependente da ativação de vias sinalizadoras celulares (principalmente pela via de MEK/ERK). Posteriormente, a atividade da cPLA2 em células HeLa foi inibida por mecanismos farmacológicos (uso do inibidor RSC-3388) ou genéticos (transfecção das células com RNA de interferência específico contra o gene codificador desta enzima) e o ciclo de multiplicação do VACV nestas condições foi avaliado. Observou-se que o tratamento das células com o inibidor RSC-3388 resultou em uma redução dose-dependente significativa nos títulos virais obtidos, mas o silenciamento gênico com RNA de interferência não apresentou o mesmo efeito. Por último, avaliou-se, por miscroscopia de fluorescência, se haveria alteração na sublocalização celular da P-cPLA2 na condição de infecção pelo VACV, mas nenhuma modificação neste padrão foi observada. Os resultados obtidos sugerem que a cPLA2 é necessária para que o ciclo de multiplicação do VACV se complete de maneira ideal, mas não foi possível correlacionar a atividade desta enzima com os processos de aquisição de membranas do vírus a partir do hospedeiro como havia sido proposto.