ELISA indireto para detecção de Ig G anti-vírus da doença de newcastle em soro de codorna

• Autor(a) principal: Daniela Duarte de Oliveira
• Data de Publicação: 2004
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUDB-8BSFKH
• topic: Coturnix coturnix japonica; Doença de Newcastle; Ig G de codorna; Codorna; ELISA; IH; Codorna japonesa; Newcastle, Doença de; Ave doméstica Doenças

Foram desenvolvidos e comparados dois ELISAs para detecção de IgG de codorna (Coturnix coturnix japônica) contra o vírus da doença de Newcastle (VDN). Um deles utilizando anticorpo secundário de camundongo anti-IgG de codorna e o outro, conjugado anti-IgG de galinha. Para a produção de anticorpo secundário (IgG de camundongo anti-IgG de codorna), métodos de purificação de IgG de codorna foram avaliados utilizando 30 amostras de soros e gemas de ovos de codornas, confirmados posteriormente por eletroforese. Apenas a IgG purificada de soro, por sua maior pureza, foi inoculada nos camundongos, em emulsão oleosa contendo 50 µg de proteína/dose, para a produção do anticorpo secundário. Trinta soros de codorna positivos contra o vírus da doença de Newcastle e 30 soros negativos, triados previamente pelo teste de inibição da hemaglutinação (IH) foram utilizados na titulação em bloco dos ELISAs. O VDN, soro positivo anti-VDN e negativo, anticorpo secundário e conjugados (IgG cabra anti-IgG de camundongo e IgG de coelho anti-IgG de galinha conjugados com fosfatase alcalina) foram submetidos a diluições seriadas para padronizar o ELISA indireto para detecção de IgG de codorna contra VDN e o ELISA indireto para detecção de IgG de codorna contra VDN utilizando conjugado anti-galinha. Os valores de absorbância obtidos pelos ELISAs foram submetidos a planilha TG-ROC e calculados os pontos de corte de cada um. Na análise dos dados, observou-se total correlação entre os testes de ELISA e IH, usada como técnica de referência. Os dois ELISAs foram eficientes na identificação de soros positivos e negativos, apresentando valores máximos de sensibilidade e especificidade (igual a um, 100%), sem resultados falso-positivos e falso-negativos. Estes resultados indicam o uso do ELISA indireto para a doença de Newcastle como técnica de triagem de soros de codorna na rotina laboratorial.