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Liza Figueiredo Felicori Vilelahttp://lattes.cnpq.br/4618441212905355Carlos Delfin Chávez OlórteguiRubens Lima do Monte NetoAna Lúcia Teles RabeloRodrigo Ribeiro Resendehttp://lattes.cnpq.br/9600358550383942Luana Paula Fernandes2024-02-21T17:23:47Z2024-02-21T17:23:47Z2021-06-14http://hdl.handle.net/1843/64416A detecção precoce de envenenamentos provocados por aranhas do gênero Loxosceles ainda é desafio para a saúde pública e para o tratamento dos acidentados, devido à dificuldade de se estabelecer um diagnóstico uma vez que a picada das aranhas é indolor e a lesão provocada por ser confundida com outras condições. Métodos de ELISA já foram avaliados quanto a possibilidade de detectar esses envenenamentos por meio da detecção de componentes proteicos do veneno. Contudo, esses métodos demandam tempo e equipamentos que inviabilizam a praticidade de um diagnóstico para ambulatórios simples. Neste trabalho, utilizamos um método rápido, simples e visual, a amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) com a proposta de detectar DNA de aranhas do gênero Loxosceles em diferentes amostras coletadas (pelo, swab e soro) de coelhos experimentalmente envenenados. Foram avaliadas diferentes condições de tempo (15, 30 e 60 minutos), concentração de iniciadores e temperatura (60, 65, 68 e 71 °C) com duas abordagens de LAMP, sendo escolhida a colorimétrica, por apresentar um limite de detecção 32 vezes melhor (0.315 pg) do que a abordagem não colorimétrica (10 pg) e 62 vezes maior que a PCR tradicional (20 pg). O ensaio desenvolvido foi capaz de detectar com eficiência, sensibilidade (de até 100%) e especificidade (100 %) o DNA de Loxosceles intermedia em diferentes amostras em um prazo de até 72 horas após o envenenamento experimental. A detecção pôde ser feita de forma visual dispensando a necessidade de visualização por géis de agarose ou poliacrilamida. Por sua facilidade de execução, rapidez, sensibilidade e especificidade a LAMP apresenta um grande potencial para a aplicação na detecção de DNA de aranhas do gênero Loxosceles o que auxiliaria no diagnóstico de envenenamentos provocados por esses animais.The early detection of poisonings caused by spiders of the genus Loxosceles is still a challenge for public health and for the patient treatment, due to the difficulty of establishing a diagnosis since the spider bite is painless and the injury caused can be mistaken with other conditions. ELISA methods have already been evaluated for the possibility of detecting these poisonings by detecting protein components of the venom. However, these methods require time and equipment that make practical diagnosis impossible for simple clinics. In this work, we use a fast, simple and visual method, the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) with the purpose of detecting DNA from Loxosceles spiders in different samples collected (hair, swab and serum) of experimentally envenomed rabbits. Different conditions of time (15, 30 and 60 minutes), concentration of iniciadores and temperature (60, 65, 68 and 71 ° C) were evaluated with two LAMP methodologies. The visual detection method was chosen because it presents a limit of detection 32 times better (0.315 pg) than non-colorimetric approach and 62 times better than traditional PCR. The developed test was able to detect with efficiency, sensitivity (up to 100%) and specificity (100%) the DNA of Loxosceles intermedia in different samples within 72 hours after the poisoning. The detection could be done visually, eliminating the need for visualization by agarose or polyacrylamide gels. For its effortlessness of implementation, speed, sensitivity and specificity, LAMP has great potential for application in DNA detection of the genus Loxosceles spiders which would help in the diagnosis of poisoning caused by these animals.FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais2023-06-14porUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e ImunologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIABioquímica e ImunologiaEnvenenamentoAranhasVenenos de AranhaDetecção de envenenamento por LoxoscelesLoxoscelismoAmplificação isotérmicaDetecção visual por LAMPIdentificação do DNA de aranhas do gênero loxosceles por LAMP como método diagnóstico do envenenamento causado por essas aranhas.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALIDENTIFICAÇÃO DO DNA DE ARANHAS DO GÊNERO LOXOSCELES POR LAMP COMO MÉTODO DIAGNÓSTICO DO ENVENENAMENTO CAUSADO POR ESSAS ARANHAS.pdfIDENTIFICAÇÃO DO DNA DE ARANHAS DO GÊNERO LOXOSCELES POR LAMP COMO MÉTODO DIAGNÓSTICO DO ENVENENAMENTO CAUSADO POR ESSAS ARANHAS.pdfapplication/pdf5946200https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/64416/3/IDENTIFICA%c3%87%c3%83O%20DO%20DNA%20DE%20ARANHAS%20DO%20G%c3%8aNERO%20LOXOSCELES%20POR%20LAMP%20COMO%20M%c3%89TODO%20DIAGN%c3%93STICO%20DO%20ENVENENAMENTO%20CAUSADO%20POR%20ESSAS%20ARANHAS.pdff2a9d81ae5207f00a9ee691b8218cb42MD53LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/64416/4/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD541843/644162024-02-21 14:23:48.443oai:repositorio.ufmg.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2024-02-21T17:23:48Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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