Identificação do DNA de aranhas do gênero loxosceles por LAMP como método diagnóstico do envenenamento causado por essas aranhas.

• Autor(a) principal: Luana Paula Fernandes
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/64416
• topic: Detecção de envenenamento por Loxosceles; Loxoscelismo; Amplificação isotérmica; Detecção visual por LAMP; Bioquímica e Imunologia; Envenenamento; Aranhas; Venenos de Aranha

A detecção precoce de envenenamentos provocados por aranhas do gênero Loxosceles ainda é desafio para a saúde pública e para o tratamento dos acidentados, devido à dificuldade de se estabelecer um diagnóstico uma vez que a picada das aranhas é indolor e a lesão provocada por ser confundida com outras condições. Métodos de ELISA já foram avaliados quanto a possibilidade de detectar esses envenenamentos por meio da detecção de componentes proteicos do veneno. Contudo, esses métodos demandam tempo e equipamentos que inviabilizam a praticidade de um diagnóstico para ambulatórios simples. Neste trabalho, utilizamos um método rápido, simples e visual, a amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) com a proposta de detectar DNA de aranhas do gênero Loxosceles em diferentes amostras coletadas (pelo, swab e soro) de coelhos experimentalmente envenenados. Foram avaliadas diferentes condições de tempo (15, 30 e 60 minutos), concentração de iniciadores e temperatura (60, 65, 68 e 71 °C) com duas abordagens de LAMP, sendo escolhida a colorimétrica, por apresentar um limite de detecção 32 vezes melhor (0.315 pg) do que a abordagem não colorimétrica (10 pg) e 62 vezes maior que a PCR tradicional (20 pg). O ensaio desenvolvido foi capaz de detectar com eficiência, sensibilidade (de até 100%) e especificidade (100 %) o DNA de Loxosceles intermedia em diferentes amostras em um prazo de até 72 horas após o envenenamento experimental. A detecção pôde ser feita de forma visual dispensando a necessidade de visualização por géis de agarose ou poliacrilamida. Por sua facilidade de execução, rapidez, sensibilidade e especificidade a LAMP apresenta um grande potencial para a aplicação na detecção de DNA de aranhas do gênero Loxosceles o que auxiliaria no diagnóstico de envenenamentos provocados por esses animais.