Produção e caracterização de uma proteína recombinante multiepitopica Loxoscelica (rMEPLox) expressa em plantas (Arabidopsis thaliana)

• Autor(a) principal: María José González Armijos
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/55545
• topic: rMEPLox; pCR8; pMDC32; Agrobacterium; Loxosceles; expressão em Arabidopsis; plantas transgênicas.; Bioquímica e imunologia; Agrobacterium; Aranha Marrom reclusa; Plantas geneticamente modificadas; Proteínas recombinantes de fusão

O veneno das aranhas do gênero Loxosceles está composta, principalmente por uma mistura rica de metaloproteinases, fosfolipases e esfingomielinases. Atualmente existem diversos estudos para a produção de anti-venenos, mediante o uso de proteínas recombinantes, com a finalidade de perseverar a vida dos animais que produzem o veneno (aranhas) bem como dos animais produtores do soro, já que este veneno é muito toxico. Por este motivo neste trabalhou objetivou-se expressar e caracterizar a rMEPLox, uma proteína recombinante quimérica composta de epitopos das três principais toxinas dos venenos de aranhas do gênero Loxosceles spp., em plantas como um novo sistema de expressão heteróloga. Inicialmente transferiu-se o gene de rMEPLox dos vetores de expressão para E. coli para um vetor plasmidial próprio de plantas (pMDC32). Seguidamente transformou-se Agrobacterium tumefaciens com estes vetores e estas bactérias específicas de plantas foram capazes de infectar a Arabidopsis thaliana mediante imersão floral. As plantas foram cultivadas e reproduzidas até obter a terceira geração (T3), para obter populações totalmente homozigotas. As proteínas totais foram extraídas de A. thaliana e o conteúdo proteico foi analisado por SDS-PAGE, ELISA e Western Blotting. Nos imunoensaios, sugerem que os extratos protéicos foram reconhecidos pelo soro anti-rMEPLox, previamente produzidos em E. coli. Por Western blotting foi possível observar a presença de bandas proteicas de aproximadamente 19 kDa, mesma massa molecular da rMEPLox. Estes resultados nos levam a confirmar o sucesso das transformações para A. thaliana; e que as plantas estão expressando a proteína rMEPLox