Estudo do gene da fotoliase de tripanossomatídeos: expressão heteróloga do gene de Trypanosoma brucei EM Trypanosoma cruzi

• Autor(a) principal: Egidio Paulo Francisco Nhavene
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9HYFYX
• topic: Genética; Tripanossoma cruzi; Reparo do DNA; Reparo por excisão de nucleotídeos; Fotoliase; Genética; Reparo acoplado a transcrição

O Trypanosoma cruzi e Trypanosoma brucei são protozoários parasitas causadores da Tripanossomíase Americana e Africana. Ambos são caracterizados pela presença de um flagelo simples e um cinetoplasto que é uma mitocôndria única e alongada que ocupa grande parte do volume celular, concatenados em uma rede de DNA. Apresentam também características morfológicas muito homogêneas, definidas em função da posição do cinetoplasto em relação ao núcleo e da presença ou não de flagelo livre e membrana ondulante. No interior dos hospedeiros invertebrados insetos ocorrem sob a forma tripomastigotas metacíclicos e epimastigotas; e nos hospedeiros vertebrados mamiferos ocorre sob a forma amastigota e tripomastigota sanguíneo. O sequenciamento do genoma desses parasitos revelou a existência de genes relacionados à manutenção do DNA tais como: a reversão direta das modificações de base por processos de dimetilação e por ação das fotoliases ou dioxigenases ou ainda por retirada de bases incorporadas erradamente no DNA recém-replicado pelo MMR, retirada de danos volumosos por NER e retirada de bases incorporadas erradamente pelo BER, reparo de DSB e SSB por HR. Dentre as vias de reparo acima descritas, a Fotorreativação é um mecanismo de reparo direto que utiliza fotoliases para catalisar a reversão de dímeros de pirimidina em monômeros. Existem vários tipos de fotoliases de acordo com a sua especificidade de substrato. Outro mecanismo que repara as lesões induzidas por UV é o NER, que se subdivide em duas subvias: Reparo do Genoma Global e Reparo Acoplado a Transcrição. O T. brucei possui dois genes da fotoliase, um nuclear codificador da fotoliase criptcromo DASH e outro mitocondrial codificador da CPD fotoliase I. No entanto, o T. cruzi possui apenas o gene da fotoliase mitocondrial criptcromo DASH. No presente trabalho estudamos o efeito da irradiação, por luz UV, em T. cruzi selvagens, T. cruzi superexpressor do gene da fotoliase nuclear de T. brucei, T. cruzi deficientes no gene CSB (heminocaute) e T. cruzi heminocaute no gene CSB que superexpressa o gene da fotoliase nuclear de T. brucei. Os resultados obtidos mostraram que o T. cruzi que superexpressa o gene fotoliase nuclear de T. brucei são mais resistentes à radiação UV do que o tipo selvagem. Outro dado importante é que as células selvagens, quando colocadas por 60 minutos sob a luz branca, após tratamento com luz UV, não retornam o crescimento. Não se verificou a mesma atividade em células deficientes no gene CSB. Esses dados sugerem que a fotoliase de T. brucei é funcional e a sua atividade é dependente da ação do gene CSB.