Padronização de Elisa indireto para diagnóstico da leucose enzoótica bovina

• Autor(a) principal: Cláudia Fideles Resende
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-AXAP44
• topic: LEB; diagnóstico; iELISA; controle; Ciência animal

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos causada pelo vírus da leucemia bovina (BLV). Esta doença tem distribuição mundial e a prevalência sorológica é alta nos rebanhos bovinos brasileiros, sendo considerada uma doença de importância econômica. A identificação e isolamento de animais positivos são necessários para controlar a disseminação do vírus e exames sorológicos são utilizados para esse fim. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição. Entretanto, ensaios imunoenzimáticos (ELISA) têm sido desenvolvidos e quando comparados ao IDGA apresentam sensibilidade mais elevada, leitura mais rápida e objetiva, além de possibilitarem o processamento de um grande número de amostras simultaneamente. A importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, por isso a ferramenta mais utilizada no país ainda é o IDGA. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB. A linhagem celular Tb1Lu infectada pelo BLV e livre de BVDV foi utilizada para a produção do antígeno. Setenta e três amostras de soro de bezerros coletadas antes e após a colostragem foram classificadas como negativas ou positivas pelo IDGA (referência). Para padronização do iELISA, diferentes concentrações do antígeno, soros controle positivo, negativo e conjugado foram avaliadas. Posteriormente, os resultados foram comparados com aqueles obtidos pelo IDGA e pelo ELISA comercial Chekit Leucose-Serum (IDEXX Laboratories, EUA). O protocolo final do teste foi definido nas seguintes condições: 1,0g de antígeno bruto por poço, soro teste na diluição de 1:25 e conjugado diluído a 1:5000. A sensibilidade e especificidade relativas ao IDGA foram 94,44% e 75,68%, respectivamente, e encontrou-se VPP=79,1% e VPN=93,3%. A concordância entre os testes foi de 84% e o índice Kappa foi 0,699. O iELISA apresentou sensibilidade de 92,6% e especificidade de 87,09% em relação ao ELISA Chekit. A concordância entre os testes foi de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Nove amostras foram negativas para o IDGA e positivas no iELISA. Quando comparado ao ELISA Chekit, o iELISA apresentou maior sensibilidade e classificou como positiva uma amostra com resultado indeterminado pelo teste comercial, demonstrando que o ensaio desenvolvido pode ser utilizado alternativamente ao ELISA Chekit. O iELISA desenvolvido constitui-se, portanto, em uma ferramenta diagnóstica complementar ao IDGA para o controle da LEB no Brasil.