Minimização da formação de B-30 Destreonina Insulina durante a conversão enzimática da Proinsulina em insulina por Tripsinólise

• Autor(a) principal: Jane Cristina Rodrigues da Cruz
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/32024
• topic: B-30 Destreonina Insulina; Insulina; Proinsulina; Conversão enzimática; Bioquímica; Insulina; Proinsulina; Anidridos Maleicos

O presente estudo visou o bloqueio efetivo de grupos ε-amino de resíduos de Lisina em cadeia B de Insulina, Insulina e Proinsulina antes das conversões enzimáticas ocasionadas pelo uso combinado de Tripsina e Carboxipeptidase B, limitando o sítio de restrição dessas enzimas ao resíduo de Arginina e assim diminuindo substancialmente a presença do intermediário B-30 Destreonina Insulina durante a produção industrial de Insulina Humana. A condições propostas são: 100:1 de reagente em relação à amostra em solução tampão Glicina pH 9,0, à temperatura de 23°C com correção imediata do pH. As conversões enzimáticas foram realizadas sob as condições supracitadas e a cada 2 horas de conversão os produtos foram analisados por cromatografia de fase reversa HPLC e espectrometria de massa MALDI-TOFMS/MSMS e Q-TOFMS. A perfil full scan obtido por Maldi TOF detectou a diminuição dos íons relativos à Proinsulina m/z 10633 e o aparecimento do íon m/z 5808 relativo à Insulina. A presença do íon correspondente a B-30 Destreonina não foi verificada quando da análise por Maldi TOF possivelmente pela supressão causada pelos demais íons da amostra em conversão cuja intensidade relativa era alta. Quando analisados por Q-TOF, o perfil do espectro apresentado para Proinsulina bloqueada e não bloqueada com 2,3 dimetilmaleico evidencia a diminuição da intensidade relativa dos íons multicarregados m/z 1902 e 1427 referentes à m/z 5708 sugerindo a presença de B-30 Destreonina Insulina. Como íon referência foi acompanhado a presença do íon de m/z 1256 relativa ao componente cauda de Histidina e que mantém a intensidade relativa nas análises Q TOF MS das amostras com e sem bloqueio de ε-amino corroborando com o tratamento proposto para a minimização da formação do composto B-30 Destreonina Insulina.