Fosfolipase C delta 4 humana (hPLCδ4): uma proteína envolvida na proliferação e na diferenciação celular

• Autor(a) principal: Marianna Kunrath Lima
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/65278
• topic: PLCδ4 humana; Sinalização de cálcio nuclear; Sinalização de cálcio; Proliferação celular; Diferenciação celular; Senescência celular; Bioquímica e imunologia; Sinalização do Cálcio; Proliferação de Células; Diferenciação Celular; Senescência Celular; Fosfolipase C delta

O Ca2+ é um importante segundo mensageiro que está envolvido na regulação de diversos processos celulares, como morte e proliferação. O aumento dos níveis intracelulares de Ca2+ pode se dar pela geração de inositol 1, 4, 5-trisfosfato (InsP3), resultante da hidrólise de fosfatidilinositol 4, 5-bisfosfato (PIP2) por fosfolipases C (PLCs), que leva à liberação de Ca2+ pelos receptores de InsP3 (InsP3R). A liberação de Ca2+ pode acontecer tanto no citosol quanto no núcleo, via PLCs, mas pouco se conhece sobre a ativação destas proteínas no núcleo. O objetivo deste trabalho foi estudar a função da PLCδ4 em células mesenquimais. Esta proteína tem sido apontada como uma proteína nuclear e parece estar envolvida em processos proliferativos. Nesta tese, foram utilizadas duas células humanas mesenquimais: as células tumorais SK-HEP-1 e células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (hASC) para a caracterização fenotípica de PLCδ4 humana (hPLCδ4). Em SK-HEP-1, o silenciamento de hPLCδ4 por RNA de interferência reduziu a proliferação celular, sem aumento da morte celular, mas com aumento da porcentagem de células nas fases G1 e G2/M do ciclo celular e redução da expressão das ciclinas A, B1 e H. Em hASC, primeiramente foi feita a localização subcelular de hPLCδ4, utilizando-se microscopia confocal. Esta proteína mostrou-se predominantemente nuclear, e ensaios de fracionamento celular também mostraram a presença de hPLCδ4 no núcleo de hASC. Em análises de expressão proteica após diferenciação celular, foi visto que a expressão de PLCδ4 aumentou com a diferenciação adipogênica, mas não com a diferenciação osteogênica. O knockdown de PLCδ4 em hASC, assim como em SK-HEP-1, diminuiu a proliferação celular, sem aumento da morte celular. Entretanto, para as células silenciadas foi observado um aumento do número de células apenas na fase G1 do ciclo celular, com redução do número de células em interfase e G2/M. A redução da expressão de PLCδ4 em hASC levou a um aumento da porcentagem de células senescentes, o que poderia explicar a redução da proliferação destas células. Desse modo, os resultados obtidos mostram que a PLCδ4 humana está envolvida em processos de proliferação e diferenciação celular, sendo estes processos possivelmente mediados pelo Ca2+ nuclear.