Interação vírus-hospedeiro: a ativação de componentes da via de resposta a proteínas mal dobradas (UPR) pelos Vaccinia virus Guarani P1 (GP1V) e Passatempo (PSTV)

• Autor(a) principal: Karine Lima Lourenço
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/35737; https://orcid.org/0000-0001-6090-4253
• topic: VACV; GP1V; PSTV; WR; UPR; Microbiologia; Infecções por poxviridae; Vírus vaccinia; Resposta a proteínas não dobradas

A família Poxviridae possui representantes mundialmente conhecidos que infectam uma gama de hospedeiros vertebrados e invertebrados, incluindo os seres humanos. Os poxvírus são divididos em duas subfamílias, a Entomopoxvirinae, a qual inclui os poxvírus que infectam insetos, e a Chordopoxvirinae, que compreende os poxvírus que infectam vertebrados. A subfamília Chordopoxvirinae possui atualmente dezoito gêneros, e o gênero Orthopoxvirus está entre os mais estudados. Desde 1999 o Vaccinia virus (VACV) tem sido relacionado a surtos envolvendo seres humanos, bovinos, equinos e outros animais. A partir de diversos estudos realizados por pesquisadores brasileiros, os isolados de VACV brasileiros (VACVbr) foram divididos em dois grupos: grupo 1 (menos virulento em modelos de infecção murina), grupo 2 (mais virulento em modelos de infecção murina). A multiplicação dos poxvírus está intimamente relacionada ao reticulo endoplasmático (RE), e as fabricas virais produzidas durante a replicação são envoltas por suas membranas. Além disso, a obtenção da conformação tridimensional correta de proteínas ocorre em sua maioria no lúmen do RE. Por consequência, esta organela é capaz de responder a perturbações ocasionadas pelo acúmulo de proteínas mal dobradas, levando ao processamento adequado dessas proteínas ou até a morte celular programada, através da via de resposta a proteínas mal-dobradas (Unfolded Protein Response – UPR). Esta via possui três sensores principais, que incluem as proteínas ATF6, IRE1 e PERK. A via UPR tem papel crucial na resposta imune, relacionando-se com a maturação e diferenciação de células imunitárias, além da produção de citocinas. Sendo assim, a modulação da via UPR teria papel importante na resposta imune do hospedeiro pela infecção por poxvírus. Neste trabalho, investigamos os efeitos da infecção pelos isolados de VACV brasileiros Guarani P1 virus (GP1V) e Passatempo virus (PSTV), sobre a ativação dos sensores da via UPR em comparação ao VACV Western Reserve protótipo do gênero. Os ensaios de gene repórter nos mostraram a ativação de ATF6 após a infecção pelos VACVbr. Nas curvas de ciclo único e múltiplos ciclos não foi possível observar diferença na produtividade desses vírus na ausência ou presença de ATF6; entretanto por fenótipo de placa é possível observar que nas células ATF6-WT as placas de lise são menores quando comparadas com as placas formadas nas células ATF6-KO. Através do ensaio de RFLP verificamos que a infecção pelos três vírus analisados modula negativamente o processamento do mRNA de XBP1, alvo de IRE1. A avaliação do fenótipo de placa na presença dos inibidores do domínio cinase e Rnase de IRE1, nos mostrou diminuição da placa de lise dos VACV-Br na presença do inibidor do domínio cinase. Curvas de ciclo único em células MEF-WT e PERK-KO não nos mostraram diferença na produtividade dos vírus GP1V, PSTV e WR, contudo os ensaios de fenótipo de placa nos mostraram placas de lise maiores nas células PERK-KO quando comparadas as formadas nas células MEF-WT. As curvas de ciclo único realizadas na presença do inibidor de BiP não nos mostraram diferença na produtividade dos VACV-Br, entretanto no ensaio de fenótipo de placa é possível observar placas de lise de tamanho menor nos poços tratados com o inibidor. Ensaios de qPCR mostraram que a infecção pelos vírus GP1V, PSTV e WR regula a expressão de genes responsivos a via UPR. Concluindo, ATF6 parece ter papel importante durante a infecção dos VACV-Br; os três vírus multiplicaram eficientemente nas células deficientes para o sensor PERK e o domínio cinase de IRE1 tem papel importante na replicação dos vírus GP1V, PSTV e WR.