Avaliação da ativação de componentes da via de resposta a proteínas não dobradas (UPR) na infecção pelo Zika virus

• Autor(a) principal: Ângela Vieira Serufo
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/32103
• topic: Zika virus; Estresse celular; UPR; IRE1; PERK; ATF6; Microbiologia; Zika Vírus; Resposta a Proteínas não Dobradas; Retículo Endoplasmático

RESUMO O Zika vírus (ZIKV), do gênero Flavivirus, é o agente causador de uma doença infecciosa emergente em muitos países, com elevado número de casos reportados nos últimos anos e forte associação causal com síndromes neurológicas graves. O entendimento sobre o comportamento do vírus no organismo é de suma importância para o desenvolvimento de mecanismos de contenção da doença, para a condução de um tratamento adequado e instauração de medidas preventivas. Os vírus evoluíram numerosas estratégias para manipular as respostas do hospedeiro e garantir o seu sucesso replicativo. Durante a replicação viral ocorre elevada produção e modificações pós traducionais de proteínas virais no retículo endoplasmático (RE) das células hospedeiras, o que resulta na sobrecarga do sistema de processamento de proteínas da organela e, consequentemente, ativa uma via de resposta a proteínas não dobradas (UPR). Essa resposta é coordenada pelos sensores IRE1, PERK e ATF6 acoplados à membrana do RE que são responsáveis por monitorar a transcrição de genes e a tradução de proteínas envolvidas no controle da UPR. Este trabalho aborda o efeito da infecção por ZIKV sobre a ativação de componentes da via UPR em células de glioblastomas neuronais humanas T98G. A infecção dessas células por ZIKV mostrou regulação negativa de ATF6, em ensaios de microcoscopia de fluorescência e microscopia confocal, bem como a não ativação da atividade transcricional de ATF6 em ensaio de gene repórter da luciferase. Ainda, a expressão de genes ativados por ATF6, XBP1 e CHOP, não tiveram elevação durante a infecção pelo ZIKV. O sensor IRE1 avaliado em ensaio que monitorou o processamento do seu substrato, o mRNA do fator de transcrição XBP1, mostrou modulação dependente do tempo de infecção, com regulação negativa até 48 horas após a infecção. A expressão de genes ativados por XBP1, como EDEM1, foi ativada em 72 horas após a infecção, o que sugere ativação tardia deste sensor. A infecção por ZIKV induziu menor expressão de genes da via PERK, como ATF4, CHOP e GADD34, em estágios iniciais da infecção, ou seja, a ativação da expressão destes genes ocorreu após 72 horas para ZIKV asiática. Já ensaio com amostra africana de ZIKV induziu expressão de CHOP mais precoce, em 48 após a infecção. A expressão de 84 genes da via de UPR em infecção com ZIKV asiática, em ensaio de matriz de PCR quantitativo em tempo real, no geral, aumentou de forma expressiva em fases mais tardias da infecção. A avaliação da produção das chaperonas BIP e calregulina foi elevada somente na infecção por ZIKV africana. Nossos achados mostraram que o ZIKV é capaz de modular de forma distinta os componentes da via UPR, regulando negativamente ATF6, até estágios tardios e IRE1 e PERK apenas em estágios iniciais da infecção, com ativação da via de reposta ao estresse do RE com maior intensidade na fase mais tardia da infecção.